20pcr反应体系如何配置

‘壹’ 配置PCR反应体系为什么要在冰上操作

在冰上可以保持各种酶及底物不失活，同时也使得酶的活性很低
对于PCR的taq酶以及分子生物学中很多酶而言，在室温下是有活性的，若在室温下操作，你在东西未加好之前就已经有副反应进行了，这不利于实验
实际上，很多时候也没这么严格，PCR如果样品不多，完全可以在室温下操作

‘贰’ 配置25ul的PCR反应体系，该怎么加关键是下面的问题

这个问题以前有人问过啊。mM指的是m mol/ml(毫摩/微升)，U一般是酶的活性单位，不同的酶对于U的定义不同，你可以看一下你用的酶上面有说明书，就会有U的定义。很多的普通Taq酶的活性单位是：用活性化的大马哈鱼精子DNA作为模板/引物，在74℃，30分钟内，摄入10nmol的全核苷酸为酸性不溶物的活性定义为1个活动单位U。
另外25μl的反应体系你买的酶的说明书中就会告诉你怎么加啊，比如如何配反应液如何加模板，自己看看吧。

‘叁’ pcr反应体系如何建立

反应体系要看用的酶。酶的说明书上有标准体系。
一般taq酶的25ul体系：
pcr
buffer2.5ul
dntp
2.0ul
mg2+1.5ul
dna模板1ul
上游引物0.5ul
下游引物0.5ul
taq酶0.2ul
最后加超纯水至25ul
还要按照反应结果自己调整用量。

‘肆’ 20微升pcr反应体系各种反应物分别应该加多少

10×扩增缓冲液2ul，4种dNTP混合物，各200umol/L 2ul，引物各10～100pmol 0.5ul，模板DNA 0.2ug，Taq DNA聚合酶0.2ul，Mg2+1.5mmol/L 1.5ul，加双或三蒸水至20ul。

PCR所用的酶主要有两种来源：Taq和Pfu，分别来自两种不同的噬热菌。其中Taq扩增效率高但易发生错配。Pfu扩增效率弱但有纠错功能。所以实际使用时根据需要必须做不同的选择。

(4)20pcr反应体系如何配置扩展阅读：

PCR反应五要素：参加PCR反应的物质主要有五种即：引物(PCR引物为DNA片段，细胞内DNA复制的引物为一段RNA链）、酶、dNTP、模板和缓冲液（其中需要Mg2+）。

DNA在高温时也可以发生变性解链，当温度降低后又可以复性成为双链。因此，通过温度变化控制DNA的变性和复性，加入设计引物，DNA聚合酶、dNTP就可以完成特定基因的体外复制。

‘伍’ 菌液或菌落PCR的反应体系怎么配置啊，同普通的PCR体系一样吗用相同的引物可以吗

体系是相同的

• 菌液PCR一般20ul体系加1ul

• 菌落PCR建议先挑单克隆溶于10ul无菌水中，取一半作为模板扩增，另一半可以作为菌种保留，如果PCR鉴定正确，再拿出来接种摇菌。

两种方法，在PCR程序上最好预变性时间长点，10min左右，或者先对细菌95度处理10min然后立即放到冰上进行预处理，以保证细菌中的质粒裂解释放。

‘陆’ PCR反应体系怎么加

你给的信息比较少呀。
你买PCR酶（taq/pfu）的时候会附赠buffer，一般是10X，50uL体系加5uL就可以了。
引物合成回来是粉末，一般溶解成100uM的储存液，然后稀释成10uM的工作液，50uL体系中0.4uM就是各2uL。
模板的话，必须要看你是什么样的DNA了。是质粒？片段？还是cDNA文库？不同的模版加的不一样，模版不一定非要按照固定量加。
dNTP买来一般是2.5mM的工作液，加2uL。
酶加1uL足够了。剩下的用ddH2O补足50uL。
先说这么多，希望你能补充一些你的实验细节，才好说具体的用量。

‘柒’ 新手出道！急求：如何将100uL的标准PCR反应体系改为20uLPCR反应体系是各成分含量缩小五倍吗

10×扩增缓冲液 2ul， 4种dNTP混合物 各200umol/L 2ul， 引物各10～100pmol 0.5ul， 模板DNA 0.1～2ug，Taq DNA聚合酶0.2ul，Mg2+1.5mmol/L 1.5ul，加双或三蒸水至20ul。

‘捌’ pcr反应体系如何选择

标准的PCR反应体系：10×扩增缓冲液 10ul
4种dNTP混合物 各200umol/L
引物 各10～100pmol
模板DNA 0.2ug
Taq DNA聚合酶 2.5u
Mg2+ 1.5mmol/L
加双或三蒸水至 100ul PCR反应五要素：参加PCR反应的物质主要有五种即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+ 引物：引物是PCR特异性反应的关键,PCR 产物的特异性取决于引物与模板DNA互补的程度.理论上,只要知道任何一段模板DNA序列,就能按其设计互补的寡核苷酸链做引物,利用PCR就可将模板DNA在体外大量扩增.设计引物应遵循以下原则：①引物长度：15-30bp,常用为20bp左右.②引物扩增跨度：以200-500bp为宜,特定条件下可扩增长至10kb的片段.③引物碱基：G+C含量以40-60%为宜,G+C太少扩增效果不佳,G+C过多易出现非特异条带.ATGC最好随机分布,避免5个以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列.④避免引物内部出现二级结构,避免两条引物间互补,特别是3’端的互补,否则会形成引物二聚体,产生非特异的扩增条带.⑤引物3’端的碱基,特别是最末及倒数第二个碱基,应严格要求配对,以避免因末端碱基不配对而导致PCR失败.⑥引物中有或能加上合适的酶切位点,被扩增的靶序列最好有适宜的酶切位点,这对酶切分析或分子克隆很有好处.⑦引物的特异性：引物应与核酸序列数据库的其它序列无明显同源性
希望有所帮助

‘玖’ PCR技术的反应体系要如何确定

根据各试剂的终浓度来确定自己添加量，至于究竟应该用多大的体系我认为要根据自己的情况来确定，常用的有20,25,50等体系。建议参考别人的文献，一般做基因克隆的文章都会写反应体系，每种试剂用量。

‘拾’ 的反应体系怎么配置啊，同普通的PCR体系一样吗

体系是相同的
菌液PCR一般20ul体系加1ul
菌落PCR建议先挑单克隆溶于10ul无菌水中,取一半作为模板扩增,另一半可以作为菌种保留,如果PCR鉴定正确,再拿出来接种摇菌.
两种方法,在PCR程序上最好预变性时间长点,10min左右,或者先对细菌95度处理10min然后立即放到冰上进行预处理,以保证细菌中的质粒裂解释放.