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封闭的bsa用什么配置

发布时间: 2022-06-28 05:20:10

A. western 抗体封闭用的bsa是五组份吗

western抗体封闭用的BSA是5%的
而且不是所有的抗体封闭都是需要BSA,只有如果是磷酸化抗体才最好用5%BSA封闭
因为脱脂奶粉含有酪蛋白,该蛋白本身就是一种磷酸化蛋白,使用脱脂奶粉会结合磷酸化抗体
一般western抗体封闭都是用脱脂奶粉就可以了
只有磷酸化抗体才最好用5%BSA封闭

B. 免疫荧光用什么封闭比较好

BSA可以用来封闭,网上查到的浓度0.5%到2%都有,1%比较常见。

孵育一抗之前要加,封闭孵育时间过后,加一抗之前不要洗掉,只移除多余液体即可.之后不需要再封闭,但是一抗和二抗都应该用含有BSA的缓冲液来稀释。有些人还加tween来减少非特异性结合。

封闭抗原也可以使用二抗抗体所属动物种类的血清.没有统一固定的浓度要看情况。

用试剂盒则有自带的封闭试剂,效果更稳定有保障。

免疫染色实验一个重要特点就是最佳条件都是试出来的,每换一个抗体条件都可能需要调整。所以最好的办法是用生产商测试过的实验方法。写个邮件问一下,就这么简单。

C. 封闭用BSA是现配还是可以多次用啊

最好是现配现用。如果确实要提前,可以存放4度,但也会很快长菌。如果加防腐剂,可能对实验结果会有影响。

D. 做WB为什么用牛奶封闭能显出来 用BSA就显不出来了

在蛋白印迹 WB 实验的封闭环节,我们经常疑惑该用脱脂牛奶还是牛血清白蛋白(BSA)来封闭,这两种封闭稀释液对实验有什么影响?

首先,我们需要了解封闭的目的:减少因非特异性结合而产生的背景。其次,我们需要知道 BSA 和牛奶的区别:BSA 仅由一种蛋白组成,即 60 kDa 的牛血清白蛋白;而牛奶则由许多大小不一的蛋白构成。

所以,CST (Cell Signaling Technology) 推荐牛奶封闭最佳,因为牛奶有更大的机会来减少更多的非特异性结合。我们建议您用经 TBST 稀释的 5% 牛奶,在室温下摇晃一小时,来封闭CST所有非偶联一抗,这包括磷酸化特异性和总抗体。

现在,曾有同学问过,“牛奶中的磷酸酶会怎么样?” 或许有一些文章反对使用牛奶来检测磷酸化信号,这一误区的出现可能是由于实验者使用了非实验级奶粉引起的(国内许多奶粉含有磷酸酶等杂质),但在 CST 的所有内部检测中,科学家们进行了多次蛋白印迹实验,从未发现任何这样的问题。CST建议转膜后迅速在TBS中洗涤膜几秒,以便移除残留的转膜缓冲液,随后使用5%脱脂牛奶(请使用实验级的#9999)的TBST室温封闭1h。另外,CST科学家们每天至少要新鲜配制一次牛奶,有时甚至一天配制多次,因为如果牛奶缓冲液放置了一周、两周甚至更长时间不使用,那么磷酸酶影响信号的机率将会增加。

上图是(Phospho-Akt (Thr308) (D25E6) XP® Rabbit mAb) #13038 用来检测经 PDGF 处理的 3T3 细胞裂解物的结果图片。左侧膜是用牛奶封闭,右侧膜用 BSA 封闭。显然,用 BSA 封闭的膜的背景更高。但用牛奶封闭膜时,磷酸化信号仍然很强且清晰。

封闭后,请仔细查看一抗的说明书,根据推荐的一抗缓冲液来稀释一抗,一般推荐牛奶或 BSA,但取决于不同抗体。

E. 蛋白标准品怎么配

你的标准品是BSA吗?
BSA是固体,可以配置成不同浓度的.
如果你的标准品BSA配置成1mg/ml的
那你每个孔浓度就是0mg/ml,0.25mg/ml,0.5mg/ml,0.75mg/ml,1mg/ml

F. western blot 封闭时什么时候用脱脂奶什么时候用BSA

做磷酸化蛋白一般不用脱脂奶,因为脱脂奶中有磷酸化蛋白,会使背景加深。其他时候一般BSA和脱脂奶通用就好了
根据经验来说,如果strip液洗过的,用脱脂奶感觉封闭的好一点

G. 细胞免疫荧光中固定的封闭液bsa是用什么稀释

可以直接用0.02M的PBS
配制封闭液封闭后不用PBS 清洗干净再浸一抗了
如果BSA 浓度是否太高,会导致最常用的封闭剂是0.05%-0.5%的BSA,封闭是否必要,取决于ELISA的模式及具体的实验条件。并非所有的ELISA 固相均需封闭,封闭不当反而会使阴性本底增高。一般说来,双抗体夹心法,只要酶标记物是高活性的,操作时洗涤彻底,不经封闭也可得到满意的结果。特别是用单抗腹水直接包被,因其中大量非抗体蛋白在包被时同样也吸附在固相表面,业已起到了类似封闭剂的作用。但在间接法测定中,封闭一般是不可少的!希望能帮到你,请采纳。

H. 作为wb封闭剂的bsa是什么等级的

推荐用TBST进行稀释获得5%的牛奶封闭液(5g\/100mL)。 很多人的经验是:脱脂牛奶封闭后背景比较干净,而检测磷酸化蛋白则用BSA(因脱脂牛奶含有较多的磷酸化蛋白,会干扰的)9991

I. BSA蛋白含量一般是多少

这个问题不具体,很难回答啊.
BSA本身就是一种蛋白,它的浓度就是它的含量.
如果假设你这个问题是这么问的:
抗体中,一般BSA蛋白的含量是多少?为了保护蛋白,通常会加入0.1%-1%,或者2mg/ml-15mg/ml的BSA作为保护蛋白,防止抗体降解
进行WB或其他免疫实验室,封闭液中BSA的含量是多少?通常1-5%的BSA会用于制备封闭液
蛋白定量时,标准品BSA的含量是多少?因为BSA要用于制作标准曲线,因此根据样品浓度,设置浓度梯度配溶液就好了.

J. 求封闭液中1%的BSA是怎么配制

这个最好用纯度高的。所谓封闭液的作用就是封闭掉任何有非特异性蛋白的结合位点。其实BSA并不是最佳的封闭选择,非特异性的IgG,或者Fc端判断才是,可以封闭掉非特异性的Fc结合位点,减少假阳性。但是考虑到价格的因素

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