高效液相色谱法中流动相如何配置

㈠ 高效液相色谱法中的样品和流动相在使用前需要注意什么

高效液相色谱仪的流动相选择时应注意： 1、尽量使用高纯度试剂作流动相，防止微量杂质长期积累而损坏色谱柱和使检测器噪声增加。 2、避免流动相与固定相发生作用而使柱效下降或损坏柱子，如使固定液溶解流失、酸性溶剂破坏氧化铝固定相等。 3、样品在流动相中应有适宜的溶解度，防止产生沉淀沉积在柱中。 4、流动相应满足检测器的要求。当使用紫外检测器时，流动相不应有紫外吸收。

㈡ 高效液相时流动相怎么选择 浓度一般是多少

大部分的液相都是反相色谱柱（如C18，即十八烷基硅胶键合柱），大部分的反相色谱流动相都是水-甲醇或者乙腈-甲醇。
有些物质易溶于水，有些物质易溶于甲醇和乙腈。比例要看物质的溶解程度，如，物质A用水-甲醇（90：10）溶剂中溶解，那么用水-甲醇（90：10）基本可以冲出来。物质B在水-甲醇（90：10）不溶解，那么就冲不出来。

为了根据特定物质吸收，会往水中加一些缓冲盐，比如磷酸二氢钾，磷酸氢二钾等。比如磷酸二氢钾水溶液0.025mol/L。有时会调节流动相的酸碱性，或者是加入其它的试剂，如离子对试剂什么的。这要看物质结构，有时要根据官能团判断。

㈢ 高效液相中流动相的配比，怎样计算呢

准备两个瓶子，一个装甲醇一个装水，装甲醇的瓶子随便装多少都行，体积无要求，装水的瓶子水和醋酸比例按照61:4 来，然后设置梯度，35：65（在仪器里设置）

㈣ 药典上高效液相色谱法测定黄柏的流动相怎么配啊

单泵，双泵都可以的。
单泵时：假如你配100ml，先配0.1%磷酸的溶液50ml，加入十二烷基磺酸钠0.1克混匀，最后加入50ml乙腈。
双泵时：A泵为纯乙腈，B泵为溶于0.1%磷酸的溶液中的十二烷基磺酸钠。
因为十二烷基磺酸钠易溶于水，所以最好先在水中溶解后再加乙腈。

㈤ 高效液相色谱法流动相如何设置比例

1、流动相对样品具有一定的溶解能力，保证样品组分不会沉淀在柱中(或长时间保留在柱中)。

2、流动相与样品不产生化学反应。

3、流动相的黏度要尽量小，以便得到好的分离效果；降低柱压降，延长泵的使用寿命(可运用提高温度的方法降低流动相的黏度)。

4、流动相的物化性质要与使用的检测器相适应。如使用UV检测器，最好使用对紫外吸收较低的溶剂配制。

5、流动相沸点不要太低，否则容易产生气泡，导致实验无法进行。

液相色谱是样品组分在柱填料与流动相之间质量交换而达到分离的目的，因此要求流动相具备以下的特点：

（1）流动相对样品具有一定的溶解能力，保证样品组分不会沉淀在柱中(或长时间保留在柱中)。

（2）流动相与样品不产生化学反应

（3）流动相的黏度要尽量小，以便得到好的分离效果；降低柱压降，延长泵的使用寿命(可运用提高温度的方法降低流动相的黏度)。

（4）流动相的物化性质要与使用的检测器相适应。如使用UV检测器，最好使用对紫外吸收较低的溶剂配制。

（5）流动相沸点不要太低，否则容易产生气泡，导致实验无法进行。

（6）在流动相配制好后，一定要进行脱气。除去溶解在流动相中的微量气体既有利于检测，还可以防止流动相中的微量氧与样品发生作用

㈥ 高效液相色谱法配流动相需要注意什么

就是按照标准配制就好了。
如果调解pH值的话，注意pH值按照标准上下不要超过0.05

另外流动相配制完成之后需要减压抽滤，然后超声10-15min，为的是脱气。防止气体进入仪器，色谱柱和检测器。

㈦ 高效液相色谱仪流动相选择应该遵循什么样的原则

1．流动相的性质要求
一个理想的液相色谱流动相溶剂应具有低粘度、与检测器兼容性好、易于得到纯品和低毒性等特征。
选择流动相时应考虑以下几个方面：

①流动相应不改变填料的任何性质。低交联度的离子交换树脂和排阻色谱填料有时遇到某些有机相会溶胀或收缩，从而改变色谱柱填床的性质。碱性流动相不能用于硅胶柱系统。酸性流动相不能用于氧化铝、氧化镁等吸附剂的柱系统。

②纯度。色谱柱的寿命与大量流动相通过有关，特别是当溶剂所含杂质在柱上积累时。

③必须与检测器匹配。使用UV检测器时，所用流动相在检测波长下应没有吸收，或吸收很小。当使用示差折光检测器时，应选择折光系数与样品差别较大的溶剂作流动相，以提高灵敏度。

④粘度要低（应<2cp）。高粘度溶剂会影响溶质的扩散、传质，降低柱效，还会使柱压降增加，使分离时间延长。最好选择沸点在100℃以下的流动相。

⑤对样品的溶解度要适宜。如果溶解度欠佳，样品会在柱头沉淀，不但影响了纯化分离，且会使柱子恶化。

⑥样品易于回收。应选用挥发性溶剂。

2．流动相的pH值

采用反相色谱法分离弱酸（3≤pKa≤7）或弱碱（7≤pKa≤8）样品时，通过调节流动相的pH值，以抑制样品组分的解离，增加组分在固定相上的保留，并改善峰形的技术称为反相离子抑制技术。对于弱酸，流动相的pH值越小，组分的k值越大，当pH值远远小于弱酸的pKa值时，弱酸主要以分子形式存在；对弱碱，情况相反。分析弱酸样品时，通常在流动相中加入少量弱酸，常用50mmol/L磷酸盐缓冲液和1%醋酸溶液；分析弱碱样品时，通常在流动相中加入少量弱碱，常用50mmol/L磷酸盐缓冲液和30mmol/L三乙胺溶液。

注：流动相中加入有机胺可以减弱碱性溶质与残余硅醇基的强相互作用，减轻或消除峰拖尾现象。所以在这种情况下有机胺（如三乙胺）又称为减尾剂或除尾剂。

流动相选择方法
1：由强到弱： 一般先用90%的乙腈(或甲醇)/水(或缓冲溶液)进行试验，这样可以很快地得到分离结果，然后根据出峰情况调整有机溶剂(乙腈或甲醇)的比例。
2： 三倍规则 ：每减少10%的有机溶剂(甲醇或乙腈)的量，保留因子约增加3倍，此为三倍规则。这是一个聪明而又省力的办法。调整的过程中，注意观察各个峰的分离情况。
3： 粗调转微调：当分离达到一定程度，应将有机溶剂10%的改变量调整为5%，并据此规则逐渐降低调整率，直至各组分的分离情况不再改变。

㈧ 高效液相色谱仪流动相如何配置

水是纯水，这只是一个比例，也就是3比1，没有什么大的要求。配好以后，抽滤一下（用0.22微米，也有用0.25微米的膜），但我也见过不过滤的。如果有条件还是过滤一下，有的检测器对气泡还是比较敏感的，也有利于仪器的保护。

㈨ 高效液相色谱的流动相如何选择需考虑哪些因素

由于高效液相色谱中流动相是液体，它对组分有亲和力，并参与固定相对组分的竞争。因此，正确选择流动相直接影响组分的分离度。对流动相溶剂的要求是：
（1）溶剂对于待测样品，必须具有合适的极性和良好的选择性。
（2）溶剂要与检测器匹配。对于紫外吸收检测器，应注意选用检测器波长比溶剂的紫外截止波长要长。所谓溶剂的紫外截止波长指当小于截止波长的辐射通过溶剂时，溶剂对此辐射产生强烈吸收，此时溶剂被看作是光学不透明的，它严重干扰组分的吸收测量。可以在网上搜索一下溶剂的紫外截止波长。
对于折光率检测器，要求选择与组分折光率有较大差别的溶剂作流动相，以达最高灵敏度。
（3）高纯度。由于高效液相灵敏度高，对流动相溶剂的纯度也要求高。不纯的溶剂会引起基线不稳，或产生“伪峰”。痕量杂质的存在，将使截止波长值增加50～IOOnm。
（4）化学稳定性好。不能选与样品发生反应或聚合的溶剂。
(5)低粘度。若使用高粘度溶剂，势必增高压力，不利于分离。常用的低粘度溶剂有丙酮、乙醇、乙晴等。但粘度过于低的溶剂也不宜采用，例戊烷、乙醚等，它们易在色谱柱或检测器内形成气泡，影响分离.

㈩ 高效液相配制流动相0.05mol甲醇如何配置

甲醇密度是0.79，分子量32。0.05mol=1.6g
,
方法一:你可以利用天平烧杯称取1.6g的甲醇溶于1L的水。也可以称取16g甲醇溶于1L水作为10倍储存液，然后取100ml稀释成1L。
方法二：1.6g个甲醇就是1.26毫升。那么你可以用移液器量出1.26ml然后用水定容到1L。也可量出12.6ml定容到1L作为10倍储存液，使用前稀释。
方法三：配置25%甲醇溶液，为20倍储存液，取储液50ml定容到1L