固态多聚甲醛如何配置

❶ 化学问题 多聚甲醛 水合氯醛 的详细配制方法 紧急！！！！！！

4%多聚甲醛-0.1mol/L磷酸缓冲液（pH7.3）:
该固定剂较适于光镜免疫细胞化学研究，最好是动物经灌注固定取材后，继续浸泡固定2～24h。另外，该固定剂较为温和，适于组织标本的较长期保存。
试剂：多聚甲醛
40g
0.1mol/L磷酸缓冲液
至1000ml
配制方法：称取40g多聚甲醛，置于三角烧瓶中，加入500～800ml
0.1mol/L磷酸缓冲液（Phosphate
Buffer以下简称PB），加热至60℃左右，持续搅拌（或磁力搅拌）使粉末完全溶解，通常需滴加少许1n
NaOH才能使溶液清亮，最后补足0.1mol/L的PB于1000ml，充分混匀。
4%多聚甲醛-磷酸二氢钠/氢氧化钠:
该固定剂适于光镜和电镜免疫细胞化学研究，用于免疫电镜时，最好加入少量新鲜配制的戊二醛，使其终浓度为0.5%～1%。该固定剂较温和，适于组织的长期保存。组织标本于该固定液中，4℃冰箱保存数月仍可获得满意的染色效果。
试剂：A液：多聚甲醛
40g
蒸馏水
400ml
B液：Na2HPO4·2H2O
16.88g
蒸馏水
300ml
C液：NaOH
3.86g
蒸馏水
200m
配制方法：A液最好在500ml的三角烧瓶中配制（方法同前），至多聚甲醛完全溶解后冷却待用。注意，在溶解多聚甲醛时，要尽量避免吸入气体或溅入眼内。B液和C液配制好后，将B液倒入C液中，混合后再加入A液，以1n
NaOH或1N
HCl
将pH调至7.2～7.4，最后，补充蒸馏水至1000ml充分混合，4℃冰箱保存备用。--------------------------------------------------------------水合氯醛试液:取水合氯醛50g，加水15ml与甘油10ml使溶解，即得。---------------------------------------------------------------------具体还是去查文献比较好，毕竟用途不一样，配置方法会有差异

❷ 甲醛溶液的配置

甲醛溶液配制：

取10ug/L注甲醛溶液10mL加入1L容量瓶中加入蒸馏水定容得到1ug/L甲醛溶液。

取1ug/L甲醛溶液10mL加入1L容量瓶中加入蒸馏水定容得到0.1ug/L甲醛溶液。

取7个50mL容量瓶分别按下表加入0.1 ug/L甲醛溶液和蒸馏水，得到下表所示浓度的甲醛溶液。

 (2)固态多聚甲醛如何配置扩展阅读

甲醛分子结构中存在羰基氧原子和α—氢原子，化学性质很活泼，它能与许多化合物进行反应，生成许多重要的工业化学品和化工中间体，这里仅介绍其中最重要的一些化学反应。

甲醛易溶于水，溶解过程系放热反应，热量大小不取决于溶液的浓度。甲醛水溶液系无色透明液体，有强烈刺激气味，沸点基本上不随其溶液浓度的改变而变化。

在标准或当地大气压下，含甲醛55%（wt.）以下的甲醛水溶液其沸点在99℃～100℃之间。25%（wt.）甲醛水溶液的沸点为99.1℃，而35%（wt.）甲醛水溶液的沸点为99.9℃。

❸ 如何用多聚甲醛制备福尔马林溶液

多聚甲醛质量分数一般在93%以上，按照含甲醛 40%比例，溶于热水中即可

❹ 4%多聚甲醛应该怎么配置

4%多聚甲醛是常用固定液，4%指的是最终的质量体积比，因此，应该是定容至1 L。如果加液1 L，40 g PFA溶入后体积稍有增加，得到的实际浓度略小于4%，但固定液的浓度要求并不是非常精确，这点浓度变化常常不会对固定效果产生影响。

❺ 大鼠脑灌流用什么甲醛

网上查阅相关资料，自己汇总，整理出来，与大家分享。马上进行灌注取脑，祝我顺利。
用途：
1.用于常规HE染色，免疫组化分析。
2.冰冻切片可以不做脑组织固定。
3.不可用于western blot和PCR。
4.如果观察脑组织的缺血、损伤或其它病变时，不作灌注固定，而是在取出脑组织后作固定，将大大影响效果。
原理：
心脏灌流术能够快速冲净血液并在动物死亡前进行组织的前固定,避免了组织的自溶现象,是脑组织切片观察的常用方法。多聚甲醛使组织蛋白发生交联，以保持蛋白的原位和表面结构不变，从而能使其对应的抗体准确检测其表达位置和量。
必要性：
1.脑组织较软，且细胞成分不易保留，脑组织是较易软化的组织之一，血供也较为丰富，所以最好是在取脑组织前用4％多聚甲醛灌注固。
2.经前固定后，取脑操作时，可减少脑组织损伤。
3.脑内血液都在，HE染色后，可去除红细胞背景影响。
大鼠灌注取脑标准操作规程(SOP)：
流程：
1)麻醉 2)开胸 3)心脏左心室穿针,剪开右心耳 4)生理盐水冲水 5)4%多基甲醛固定 6)取脑 7)保存或切片.
具体过程：
大鼠经深度麻醉后，固定于自制的手术木板上,置于解剖盘中,开胸暴露并游离出心脏,经左心室插入灌流针并固定, 切开右心耳,先灌注冰冻无菌生理盐水(4℃)XmL，直到肝和肺脏颜色转白及右心房流出液澄清,后再灌注冰冻(4℃)4%多聚甲醛XmL,断头取脑,多聚甲醛浸泡固定24小时。
Tips：
1.多聚甲醛的配置：
一般方法为：4％多聚甲醛PBS缓冲液配法：称取40g PFA溶于装有500mlDEPC水的玻璃容器（烧杯或烧瓶）中，持续加热磁力搅拌至60～65℃，使成乳白色悬液。用1.0mol/L的NaOH值至7.4，使呈清亮状（滴加），再加入约500ml PBS，充分混匀（在冰浴或冷水浴中），可再检测一下pH，过滤后定容至1000ml，室温或4℃保存备用。
简便方法：先配好PBS，称好相应的多聚甲醛，37℃水浴或温箱密封放置2天，就能全溶。若是很急，55℃水浴一天，期间不时震荡。注意，4%的多聚甲醛需临用前配制,配制后需过滤去除小的杂质,避免心脏灌流时造成栓塞影响灌流效果。
2.制作灌注装置，用两瓶塑料包装的输液瓶装灌注液。同时配好输液器备用。
3.10％水合氯醛按4mL/100g的剂量腹腔注射麻醉动物。
4.沿两侧肋弓剪开皮肤，打开腹腔，用一血管钳夹持剑突并向上提拉，用弯剪在膈肌与胸骨柄相连处剪一小口，造成人工气胸，然后向两侧顺延，剪断膈肌及肋骨，夹持剑突的血管钳将剑突连带胸廓上翻固定，充分暴露心脏，直视下穿刺针左心室心尖处，用血管钳固定。
5.快速滴注生理盐水(室温)，同时剪开右心耳。约注入100~150mL，至流出液体血色较浅基本澄清，停止灌注。肝脏、眼珠、爪子迅速变白是排出血液的有效观察指标。
6.继续用4%多聚甲醛灌流250ml固定。
7.后固定：灌流后的脑组织置于4％PFA置4度冰箱内进行后固定，时间>2h，过夜最好。
补充：
还有一种省时省剂的方法。
夹闭腹主动脉：只灌注上肢及头脑，固定的好又快，又省试剂。先灌注生理盐水约100ml，见到老鼠两前肢及两肺变白可改灌注多聚甲醛。多聚甲醛用100ml以下即可。
灌注成功的标志：刚开始灌注时老鼠前肢剧烈抽动（下肢不抽动证明腹主动脉夹闭完全）；前肢及颈部僵硬；所灌注的脑组织白而硬。
注意事项：
1.多聚甲醛气味刺激，配置时做好自我保护。
2.暴露心脏这一步骤，容易损伤肺、心脏或者肝脏，“夹持剑突并向上提拉，用弯剪在膈肌与胸骨柄相连处剪一小口，造成人工气胸”，人工气胸后，肺萎缩，胸腔里的空间增大，提拉剑突后，不容易损伤肺、心及肝脏，出血少。
3.经心脏灌注，有时穿刺针会误进右心室，那样灌注主要在肺循环起作用，体循环的血液影响不大。所以观察将穿刺针插入到主动脉内可以确保起到体循环灌注冲洗血液的效果，脑组织的血液冲干净后，才不会影响免疫组化的效果，不然到处都是红细胞造成的背景染色。
4.灌注时注意排空输液管中的气泡不然容易气栓，影响灌注效果。一定要看到大鼠较剧烈抽搐，不然证明灌注不好。
5.关于生理盐水的温度的选择，有人认为因为是快速冲刷血管里的血液，低温造成血管收缩，灌注的效果反而没有室温的好。但是用低温的认为，低温有利于组织完整。
6.灌注成功的标志：刚开始灌注时老鼠剧烈抽动；成功后老鼠后肢绷直，尾部竖起成一直线；所灌注的脑组织白而硬。
7.去颅骨后脑表面有一层硬脑膜,要去掉。
常见问题：
1.灌注取脑不可用于Western blot及PCR的原因。
答：多聚甲醛使组织蛋白发生交联，以保持蛋白的原位和表面结构不变，从而能使其对应的抗体准确检测其表达位置和量。
Western中，要用去污剂使各种蛋白发生变性、解聚，并变成统一的线性肽链，从而能够用凝胶电泳进行分子量的梯度分离。多聚甲醛会影响蛋白的解聚，从而使其无法用凝胶分离。
另外，WB和免疫组化所使用抗体的抗原表位也不同，WB的抗体一般识别蛋白的一级结构，所以可能也无法识别甲醛处理的蛋白。
PCR要提RNA，RNA非常容易降解，必须新鲜取组织，然后尽快超低温冷藏或者马上抽提，否则非常容易降解。灌注固定的组织，原则上是能够提得出DNA和RNA的，但是肯定会有较多的降解，一般不会这样做。
2. 没有灌注固定的大鼠脑组织,能不能做切片和免疫组化？
答：如果没有灌注固定，而是直接取材然后放入固定液中，可以进行免疫组化染色，只是效果不如灌注固定的好，尤其是要做电镜时更明显。有的标记蛋白要求较高，固定不好就难以染好。
3. 用4%多聚甲醛固定但保存了2周才做石蜡切片，不知对免疫组化有无影响？
答：固定时间过长蛋白多肽链都交连在一起了,抗原性就很弱了，很可能没有阳性结果,抗原修复时一般的修复很难把抗原性恢复. 可能会有影响，但不会太大。固定时间长，抗原修复时间也要长一些。
4.灌注多长时间？灌注液多少？
看了很多经验，每个人的灌注液用量都不一样，灌注速度也能没有很清楚的说法，灌注时间也不确定。我的总结为，还是看灌注成功的标志。现将看到的比较详细的处理方法列出。灌注速度，大家比较公认的是先快后慢。
短期灌注：采用心脏穿刺快速灌注20 min,其中生理盐水灌注50~100mL,4 %多聚甲醛缓冲液灌注150 mL。
长期灌注：灌注时间延长到1 h,其中生理盐水灌注200mL,4 %多聚甲醛缓冲液灌注400 mL。
短期灌注组脑组织结构保留基本良好,与长期灌注组相比稍差,研究皮层和海马结构损伤基本可以满足;长期灌注组结构保留最好,但是耗时长、固定液用量大,致使试验进度慢等缺点不容忽视。,对皮层和海马缺血再灌注损伤研究选择短期灌注取脑尚可满足需要,深部脑白质及核团缺血再灌注损伤研究还是要用长期灌注固定取脑法,或者在取脑后立即根据实验取材要求将脑切成块再浸泡入固定液充分固定。
下面是夹闭腹主动脉:
每只大鼠先快速推注生理盐水50 ml冲洗,继而灌注固定液(如4%多聚甲醛等)50~80 ml,先快后慢,需10~15 min,在灌注固定液过程中,颈部逐渐变硬;灌注结束后,开颅取出脑组织,置于固定液中后固定24 h。
5. 体循环与肺循环的鉴别？
体循环时大鼠肝脏变白现象出现较早,在灌注多聚甲醛后,四肢会出现明显的抽搐现象,尾巴和四肢明显僵硬。若灌流针误插入右心室,会导致灌流液沿肺循环途径灌流,这时肝脏变白出现的较慢,四肢的抽搐现象没有体循环明显,且鼻腔中有时会有灌流液流出。因肺循环会影响组织器官的灌流效果,因此进针时要准确,避免肺循环的发生。一旦出现肺循环指征,应及时调整进针角度。
6.适宜的灌注压？
灌注压过小,不利于灌注液在组织中的灌流,灌注压过大,会造成毛细血管和器官组织的损害,不利于组织切片的观察。一般灌注生理盐水时灌注压在20伏左右,快速灌流多聚甲醛时一般在10伏左右,待大鼠四肢出现明显抽搐后,再缓慢灌流多聚甲醛30min,灌注压一般在5伏左右。

❻ 4%甲醛是干什么用的

4%的甲醛溶液实际上指的是10%甲醛溶液，因为甲醛溶液本身含量为39%，一般用水稀释配成10%的溶液用作组织固定用。习惯上叫10%甲醛溶液，实际上含甲醛量是4%。

4%的多聚甲醛是用PBS溶解固体多聚甲醛配成。

多聚甲醛是固体试剂，甲醛是液体试剂；二者配置方法也不一样，多聚甲醛需要在加热的条件下配置，时间很长，溶剂是PBS。甲醛可以直接用H2O稀释配置而得。

❼ 多聚甲醛固定后组织膨胀的原因

多聚甲醛之所以能够起到很好的固定效果，和它的制作工艺、物理性质和化学性质是分不开的。
多聚甲醛多制成多聚甲醛固定液来进行固定，多聚甲醛液的配方决定了多聚甲醛的固定性，多聚甲醛液中含有pbs溶液，HCL，这些溶液和多聚甲醛按照一定的方法混合在一起就具有了个定作用。

❽ 求助）组织固定（甲醛，多聚甲醛，配制

我们固定脑组织做免疫组化染色就是这么做的。但是在配置多聚甲醛的时候，由于多聚甲醛很难融解，以般需碱性条件，并附以温热融解。如果直接配成PB＋多聚甲醛，比较难融解。我们是先用蒸馏水配置500ml8％多聚甲醛，融解后加入500ml 0.2 M PB。

❾ 多聚甲醛干粉固定组织怎么配置4

使用4%的多聚甲醛可以固定标本不能超过48hours,固定时间太久组织会变脆
如果是在温度4°以下最多可以放一个月，但是肯定会损失抗原的

❿ 将4%的多聚甲醛溶液稀释为1%的应该怎么配置

假设这份4%的溶液为100克，那么水为96克，甲醛为4克，那么配置为百分之一的溶液，需加水300克，
同理，假设这份溶液为100x克，那么水为96X，甲醛味4X克，那么要配置为百分之一的溶液，因为甲醛味4X克，需要溶液396X克才变为百分之一的溶液，原先有水96x克，那么虚加入水396x-96x=300x克水