10倍PCR缓冲液如何配置
A. 10 PCR buffer 怎么配置
10×十二烷基硫酸钠/甘油凝胶上样液（室温贮存）
成分及终浓度 配制10ml溶液各成分用量
0.2％溴酚蓝 20mg
0.2％二甲苯青FF 20mg
200 mmol/L EDTA 4ml 0.5mol/L EDTA(pH8.0)
0.1％SDS 100ul 10％ SDS
50％甘油 5ml
补足 水 20mg 到10ml
B. 关于PCR溶液体系的配制
加入量和浓度有关，只要知道每一个要加入物质的浓度就可以算出来了：
模板的体积=25ng/模板的浓度 （这个值需要测定，如果实在不知道模板浓度，就加0.1-0.5ul左右吧）
引物的体积=0.5umol/1000uL * 10uL / 引物浓度 （根据自己配制的情况，有时候可能是100mM或者是200mM）
Taq酶体积= 0.5 U / Taq 酶活力单位浓度（标注在管子上，U/uL表示的数字）
Buffer的量应该是1uL。（这里需要解释一下，经过确认，没有1X的buffer，因为如果是1X的话，没法加了，所以正确的应该是10X的buffer，加入量就是稀释10倍，所以10uL体系加1uLbuffer）
C. PCR体系怎么配
PCR Buffer50 mM KCl, 10 mMTris-HCl, 2.5 mMMgCl2, pH 8.3
200μM dNTPs指25ul体系中的dNTPs的终浓度。
0.2 μM invA primers,0.2 μM终浓度的配对链引物。
0.2μM sefA primers, 0.2 μM终浓度的自身链引物(下游引物)。
and 0.5 μM pefA primers
2.5U of Taq DNA polymerase，2.5U的Taq酶，一般Taq酶都是5U/ul的。
and 0.2μl of DNA template，0.2ul DNA模板。
剩余的体积用无菌水补足25ul。
(3)10倍PCR缓冲液如何配置扩展阅读
设计PCR 引物时的一般原则：
1、引物长度- 一般15~ 30碱基，过短则特异性低; 过长则会引起引物间的退火而影响有
效扩增。
2、 避免内部二级结构，避免序列内有较长的回文结构，使引物自身不能形成发夹结构。
3、G/C 和A/T 碱基均匀分布，G/C 含量在45%~ 55% 之间，引物碱基序列尽可能选
择碱基随机分布，避免嘌呤、嘧啶的连续排列。
4、要避免两个引物间特别是3' 末端DNA 序列互补以及同一引物自身3' 末端的序列互
补，使它们不能形成引物二聚体或发卡结构。
5、引物3' 端碱基一般应与模板严格配对，并且3' 端为G、C 或T 时引发效率较高。
6、 引物5' 端碱基可不与模板匹配，可添加与模板无关的序列(如限制性内切酶的识别
位点、ATG 起始密码子或启动子序列等)。
D. pcr中镁离子用什么稀释
pcr中镁离子用什么稀释
1. pcr中mg离子的作用
镁离子浓度一般用量1.5-2.0 mmol/L，Taq DNA聚合酶活性需要Mg 2+。
Mg 2+浓度过低，会显着降低酶活性。Mg 2+浓度过高又使酶催化非特异性扩增增强。Mg 2+浓度还会影响引物的退火、模板与PCR产物的解链温度，从而影响扩增片段的产率。Takara的mg离子的浓度一般是25mM的，20ul体系我们一般加1.2ul的MgCl2，效果挺好的
2. pcr mgcl2
标准的PCR操作程序是将各种所需反应成分分别加入PCR反应管中，然后根据具体的实验要求，设置一定的循环参数，进行循环扩增。具体如下：
(1) 向PCR反应管中依次加入
DNA模板 50～300ng (约为102～105拷贝DNA)
引物(3'→5'，5'→3')各 2μl 10μmol/L (终浓度为0.4μmol/L)
dNTP 2μl 5mmol/L (终浓度为0.2μmol/L)
10×PCR缓冲液 5μl 1/10体积 (终浓度为1×)
MgCl2 3μl 25mmol/L (终浓度为1.5mmol/L)
Taq DNA聚合酶 0.5μl (终浓度约1～5U/μl)
ddH2O 补到终体积为50μl，混匀后，离心15 s使反应成分沉于管底。
(2) 加入矿物油20～30μl（2～3滴），以避免反应液蒸发(有热盖的PCR仪可省此步骤)，然后将反应管置于95℃（变性）5min。
(3) PCR的循环程序一般为：94℃～96℃变性30s， 50℃～55℃退火30～60s，72℃延伸(1kb/1～2min)，循环25～30次。末次循环结束后，将反应管置于72℃温育5min，以确保充分延伸。
3. pcr中mg2+作用
1.化学本质都是蛋白质,
2.合成位置一般都在核糖体内.
3.作用：
解旋酶：就是作用DNA的,一般用在PCR技术中来打开一些DNA的二级结构.例如一些发卡结构,有利用DNA的复制.
DNA聚合酶：在PCR过程中,以DNA或cDNA为模板,以引物,dNTP,Mg2+等试剂为原料复制DNA所用到的一种不可或缺的酶.
RNA聚合酶和DNA聚合酶一样,只是他是用来复制RNA的.
逆转录酶：以RNA为模板,把RNA转变为单链的cDNA.以利于后续的DNA克隆以及文库构建.
限制酶：就是通常所说的限制性内切酶,不同酶的作用位点不一样切断DNA,一般用于分子克隆与载体构建等基因工程技术.
DNA边接酶：就是将限制性内切酶切断的DNA片断又重新连接成一条DNA.连接的DNA片断一定是同一个限制性内切酶切割产生同样粘端的片段,或者是不同酶切割产生平端的片段,但是这样的连接效率一般较低.
4.这些酶一般通过克隆,表达获得.存在不同生物体内.
4. pcr中加mg是为什么
PCR反应需要加镁离子，并且镁离子浓度的总量应该比dNTPs的浓度高，常用1.5mmol/L。 镁离子是加在PCR反应的缓冲液中的，成分是最复杂的，除水外一般包括四个有效成分：
1、缓冲体系，一般使用HEPES或MOPS缓冲体系；
2、一价阳离子，一般采用钾离子，但在特殊情况下也可使用铵根离子；
3、二价阳离子，即镁离子，根据反应体系确定，除特殊情况外不需调整；
4、辅助成分，常见的有DMSO、甘油等，主要用来保持酶的活性和帮助DNA解除缠绕结构。 缓冲液的目的是提供合适的酸碱度与某些离子，而PCR反应五要素是：引物(PCR引物为DNA片段，细胞内DNA复制的引物为一段RNA链）、酶、dNTP、模板和缓冲液（其中需要Mg2+）。
5. 在一般的pcr反应中,mg2+浓度为
以25ul的pcr体系为例，一般用浓度是25μmol/L的dNTP 2ul, 10μmol/L的引物1ul，2.5 mmol/L Mg2+ 2ul，模版一般1ul，2000u 的酶0。5ul。
buffer一般选用10x，就是稀释10倍使用，每25ul体系加10xbuffer 2。5ul。u是酶活力单位。ng就是10－9 g ；1000x μmol/L＝ mmol/L换算是x=1000 mx=1000000ux=1000000000nx x可以是g,l,mol等国际计量单位。
6. Mg离子的作用
化学方程式：Mg(OH)2 + 2NH4Cl == MgCl2 + 2NH3.H2O离子方程式：Mg(OH)2 + 2NH4+ == Mg2+ + 2NH3.H2O
7. pcr扩增mg离子浓度
因为镁离子是TapDNA酶不可或缺的辅助因子，镁离子对于稳定核苷酸和稳定扩增体系，提高tapDNA聚合酶的活性十分重要。镁离子浓度过低使酶活力降低，过高使酶催化非特异性扩增。
镁离子是由镁原子失去最外层的两个电子得到的，书写为Mg²+。
8. mg对pcr的影响
PCR实验中的Mg2+是指镁离子，一般在反应缓冲液中均含有镁离子，镁离子与聚合酶结合降低聚合反应的活化能，可以调节镁离子浓度获得最理想的反应条件。垍头条莱
9. mgcl2在pcr中的作用
Mgcl2的作用主要是促进核酸骨架的形成，影响聚合酶的4活性。Mgcl2浓度过高会降低扩增特异性，浓度过低影响扩增产量。
E. 10×pcr缓冲液配制什么意思
10×pcr缓冲液配制什么意思：
意思就是缓冲液。10×PCR buffer 就是浓缩了10倍的PCR缓冲液，使用的时候要稀释10倍。
F. pcr配液过程中正确的操作是什么
本文介绍了 PCR 的详细操作流程，强调了实验中的注意事项，列举了常用缓冲液的配方。帮助我们在理解实验的基础上更顺利的操作。
聚合酶链式反应（Polymerase Chain Reaction，PCR）是体外合成双链 DNA 的一种方法，其原理类似于天然 DNA的复制过程，其特异性主要依赖于与其目的片段两端互补的特异引物和高特异性的酶（热启动酶） 。典型的 PCR反应有三个步骤：变性，退火，延伸，经过多次循环反应，获得目的片段。
一．试剂准备
1.DNA 模板
2.特异性引物
3.dNTP Mix
4.PCR buffer
5.热启动酶
二．操作步骤
1.配置反应体系
将各成分依次加入到 0.5ml 的离心管中
扩增使用热启动酶，可在常温下操作，非热启动型的酶要在低温配置反应体系。
2.按照试剂盒说明书设置反应时间和温度，扩增结束后电泳鉴定
3.琼脂糖核酸电泳
· 将电泳所用器具蒸馏水洗净，架好梳子
· 根据要分离的 DNA 片段大小制备合适浓度的琼脂糖凝胶，准确称取一定的琼脂糖加入到锥形瓶中，加入 30ml 左右的电泳缓冲液（TAE 或 TBE）
· 在微波炉中加热融化后冷却至 40℃左右，充分混匀后倒入电泳槽中
· 室温下凝固 40 分钟左右，小心拔出梳子，将凝胶放置电泳槽中准备点样
· 在电泳槽中加入电泳缓冲液，漫过凝胶表面即可，点样孔内不要有气泡
· 样品点样前准备好，（在八连管中）加入 5ul 样品，1ul 的 6xLoding buffer 和 1ul 的染料混合，用抢将混合后的样品缓缓注入到点样孔中，注意不要串孔
· 按照正负极（红正黑负），接通电源，电压 40-60V，时间 30-40min，可根据溴酚蓝的位置判断是否终止电泳
· 电泳结束，关闭电源，凝胶成像观察，并对比 marker 确定片段大小
不同的琼脂糖浓度分离不同大小的 DNA 片段：
G. 问一下，我想稀释PCR产物（10倍，100倍，1000倍)进行二次PCR，怎么操作
比如吸取1ul加入到9ul水里，再取稀释10倍的1ul加入到9ul水你里面，以此类推
再有他所说的影响一般在稀释后不会存在，一般35个循环的话，稀释一百倍是我的经验值，当然一万倍都是可以的
H. 问一下，我想稀释PCR产物（10倍，100倍，1000倍)进行二次PCR，怎么操作
这个简单唉，使用梯度稀释法
原液
（A）
原液1ul+9ul水——稀释10倍
（B）B剩下9ul
B的1ul+9ul水——稀释100倍（C）C剩下9ul
C的1ul+9ul水——稀释1000倍（D）D有10ul
分别作为模版PCR即可！！