胰蛋白酶消化液怎么配置

A. 细胞培养时 0.25%胰蛋白酶怎么配制

可以用PBS配，也可用无血清培养及配置。
称取咐猜0.25g胰酶，加入到100mlPBS或无血清培养集中，搅拌混匀，避免出现泡沫（损坏蛋白)，过滤除菌，即可用，注意不要反复冻融，也不要放4度或常温一周，否则胰族租酶会失活。
我用PBS配的，兆简兆挺好用。

B. 如何配置胰酶+EDTA消化液

看要做检测细胞表面标记尽量要使迟旅用胰酶消化否则能破坏表面构象导致假阴性码清凳类情况使用弹性酶胶正激原酶等短间消化或者单独使用EDTA

C. 10%胰蛋白酶怎么配

首先看一下瓶子上面，写的是多森哗少ug，或者有的是液体状态的看看多少浓度好春并，如果是10ug，那么就加入100ul的去离子水友迹，得10%胰酶，如果是浓度的，比如50%，你就稀释5倍

D. 细胞培养用的胰蛋白酶自己配置和买的试剂有什么区别一般0.25%胰蛋白酶的用量是多少

1跟2、3的区别：酚红，主要做指示剂用的，用来调节其PH，通过颜色可以观察出，一般动物细胞传代用的胰酶PH值在7.0~7.4之间。
1、2跟3的区别：主要体现在EDTA上面，动物细胞表面很多和培养皿结合的蛋白都是带有钙或者镁离子的蛋白，EDTA对钙镁离子有很好的螯合仔绝作用，这样就可以更好的辅念旅姿助胰酶降解相应的蛋白质，在消化效率上，会有很好提高，至于不含钙镁离子，这个，镇脊想想就知道了，溶液中含钙镁肯定会减弱其胰酶的活性的。

E. 5%的胰蛋白酶怎么配啊

十九份缓冲液，一份胰蛋白酶

F. 25%胰酶蛋白

EDTA是乙二胺四乙酸,一种金属螯合剂.一般和胰蛋白酶配合使用.原因做基在于,钙,镁等金属离子会降低胰酶活力,故在使用胰酶消化液时要纯游谨配合加入EDTA.它可以螯合这磨友些离子,消除对胰酶的抑制.

G. 请教胰酶使用注意及贴壁细胞的消化

博凌科为生物科技-为你解答：胰酶使用注意：1、在使用胰酶细胞消化液的过程中要特别注意避免消化液被细绝或橘菌污染。2、胰酶细胞消化液消化细胞时间不宜过长，否则细胞铺板后生长状况会较差。贴壁细胞的消化：1、吸去培养液，用无菌的PBS、Hanks液或无血清培养液洗涤细胞一次，以去除残余的血清2、加入少量胰酶细胞消化液，略盖过细胞即可，根据胰酶效率差异可以增加惑减少胰酶用量。室温放置30秒至2分钟（不同的细胞消化时间有所不同）3、显微镜下观察，细胞明显收缩，并且肉眼观察培养器皿底部发现细胞的形态发生明显的变化呈白茫状；或者用枪吹打细胞发现细胞刚好可以被吹打下来。4、此时吸除胰酶细胞消化液。加入含血清的完全细胞培养液，吹打下细胞，即可直接用于后续实验如果发现消化不足，则加入胰酶细胞消化液重新消化。如果发现细胞消化时间过长，未及吹打细胞，细胞已经有部分直接从培养器皿底部脱落，直接用胰酶细胞培养液把细胞全部吹打下来。1000-2000g离心1分钟，沉淀细胞，尽量去除胰酶细胞消化液后，加入含血清的完全培养液重新悬浮细胞，即可用于后续实验。常用的细胞团塌消化液为胰蛋白酶（Trypsin），EDTA等，其功能主要是使细胞间的蛋白质（如细胞外基质）水解，改变细胞间的连接，使组织或细胞片分散成单个细胞，制成细胞悬液用于进一步的实验。影响消化速度的因素较多，主要有胰酶溶液的活性（配制条件、冻存或4℃保存时间长短、是否反复冻融、化冻后存放时间及温度等）、消化时的温度（气温、细胞培养瓶及胰酶溶液的温度）以及所加胰酶溶液的多少等 。加入胰蛋白酶-EDTA溶液，视细胞瓶的大小加入体积为2ml或更多（依培养器皿的大小而定），以使充分浸润；一般消化时间约为1至3分钟，肉眼观察瓶底由半透明（细胞单层连接成片）转为透明、点状（出现细小空隙）时，弃去细胞消化液，或看见培养瓶壁呈白茫 状即可。并加入适量的完全培养液终止消化，吹打分散；如见大量细胞片状脱落，已消化过头，则不能顷倒消化液而直接进行下一步操作。（消化过头，可造成大量 细胞从瓶壁上脱下，甚至造成细胞破碎。由于血清含有非特异性胰蛋白酶抑制剂，所以加入完全培养基可以终止反应。胰酶配置方法：1、培养液配制，方便好用，对细胞影响小，并且培养液的ph值正好适合胰蛋白酶的溶解2、生理盐水配制，要先调ph值7.2到7.4（①胰酶（1：250） 2.5 克②EDTA-Na 0.3克③NaCl 8.0克④KCl 0.4克⑤Glucose 1.0克⑥Phenol Red 0.005克⑦Water 1000 mL磁力搅拌2-3小时，调pH 7.8-8.0，过滤除菌。）3、pbs（0.1%胰酶溶液的配制：称取胰酶粉末0.1g，先用少许灭菌过的PBS调成糊状，然后补足到100ml。置室温搅拌4小时或冰箱内过 夜，过滤灭菌，分装，4℃保存备用。）; 或是hanks或是D-hanks液配制（1.称取胰蛋白酶粉末置烧杯中，先用少许D-Hanks 平衡盐溶液（pH7.2 左右）调成糊状，然后再补足D-Hanks 平衡盐溶液，搅拌混匀，置室温4 小时或冰箱过夜，并不断搅拌振荡；2.次日，先用滤纸粗滤，再进行过滤除菌，分装入瓶中，低温冰箱保存备用，常用浓度为0.25% 或0.125%。胰蛋白酶溶液偏酸，使用前可调用碳酸氢钠溶液调pH 至7.2 左右。）一般0.45微米的一次性滤器过滤除菌，至于作用效果，需要消化一次细胞感觉一下，因为不同厂家的酶不一样，有的作用温和，有的作用剧烈。4、是否需要四度放置过夜，取决于你的胰酶的纯度。过去的胰酶纯度不高，所以难以溶解，需要四度过夜. 而现在的胰酶纯度都很高，就没有必要四度过夜。从理论上来说，四度放置过夜，给细菌生长的机会，尽管过滤可以出去细菌，可是出不掉其代谢产物。胰蛋白酶不溶,有絮状物的原因，考虑有：1、过期或是酶已经部分变性2、溶液ph值不对3、在没过滤之前的絮状沉淀是正常现象，因胰酶多取自动物胰腺，沉淀为并团组织块，过滤后即可

H. 胰蛋白酶配制需要缓冲液吗

样品是粗蛋卜答白。 胰蛋白酶工作条件为37度，PH8.5的微碱性嫌弊野环境，缓冲芹喊液使用25mM的碳酸氢铵即可，终浓度为0.01ug/ul

I. 求生化试剂中用于细胞培养的胰蛋白酶EDTA消化液的使用方法。

1. 贴壁细胞的消化：
a) 吸去培养液，用无菌的 PBS、Hanks 液或无血清培养液洗涤细胞一次，以去除残余的血清。
b) 加入少量胰蛋白酶-EDTA 消化液，盖过细胞即可，室温放置 1-2 分钟。不同的细胞消化时间有所不同，对于贴壁牢固的细胞可适当延长消化时间。
c) 显微镜下观察，细胞明显收缩，并且肉眼观察培养器皿底部发现细胞的形态发生明显的变化；或者用枪吹打细胞发现细胞刚好可以被吹打下来。此时吸除厅举消化液。加入含血清的细胞培养液，吹打下细胞，即可直接用唤弯于后续实验。
d) 如果发现消化不足，可加入胰蛋白酶-EDTA 消化液重新消化。
e) 如果发现细胞消化时间过长，未及吹打细胞，细胞已经有部分直接从培养器皿底部脱落，和伏闷直接用胰酶细胞培养液把细胞全部吹打下来。1000-2000g 离心 1 分钟，沉淀细胞，尽量去除胰酶细胞消化液后，加入含血清的完全培养液重新悬浮细胞，即可用于后续实验。
2. 组织的消化：
不同的组织需要消化的时间相差很大，通常以消化后可以充分打散组织为宜。
可以看看索莱宝的胰蛋白酶EDTA消化液。