pbsbsa怎么配置
㈠ 20%BSA应该怎么配置
在化学上有二种百分比浓度,一是重量/体积百分浓度,另一种是重量/重量百分浓度,二种配法如下:
一、重量/体积百分浓度:先称取20gBSA用适量水(固液总体积小于100ml,) 完全溶解,冷却后补加水至100ml刻度,搅匀或摇匀。这是最常用的方法。
二、重量/重量百分浓度:先称取20gBSA,再称取用适量水(固液总体积小于100g)完全溶解,冷却后补加水至总重为120g,搅匀或摇匀。
㈡ BSA稀释用什么配制
|||5%BSA均用1×PBS稀释,看看,用PBS,你再做一次.|||5%BSA均用1×PBS稀释,用PBS,你再做一次.|||用0.1mol/LTris-HCl配也行.|||用0.1mol/LTris-HCl配也行.
㈢ 蛋白标准品怎么配
你的标准品是BSA吗?
BSA是固体,可以配置成不同浓度的.
如果你的标准品BSA配置成1mg/ml的
那你每个孔浓度就是0mg/ml,0.25mg/ml,0.5mg/ml,0.75mg/ml,1mg/ml
㈣ 体积分数为0.5%的牛血清白蛋白(BSA)如何配制用水配还是用别的溶剂呢麻烦写出详细的配制方法,谢谢
你是干什么用?如果是做ELISA之类免疫学实验,用PBS就可以了,0。5%就是称0。5克BSA然后溶在100mlPBS里面。
㈤ 求封闭液中1%的BSA是怎么配制
取1g BSA,加蒸馏水,定容到100ml就行了。
最常用的封闭剂是0.05%-0.5%的BSA,封闭是否必要,取决于ELISA的模式及具体的实验条件。并非所有的ELISA 固相均需封闭,封闭不当反而会使阴性本底增高。
一般说来,双抗体夹心法,只要酶标记物是高活性的,操作时洗涤彻底,不经封闭也可得到满意的结果。
特别是用单抗腹水直接包被,因其中大量非抗体蛋白在包被时同样也吸附在固相表面,业已起到了类似封闭剂的作用。但在间接法测定中,封闭一般是不可少的。
(5)pbsbsa怎么配置扩展阅读:
判断封闭条件,要考虑在此条件下是否能达到试验要求,即棋盘滴定要满足:阳性样品OD=0.8、阴性样品OD<=0.1,而不是看你待测样品OD变化趋势;
过低封闭浓度势必造成本底过高,但过高又会使灵敏度降低,因此只要选择能够满足你试验要求的最低BSA浓度就可以了。
另外提醒,洗涤一定要彻底,很重要的。
包被后封闭前一般要洗涤一遍,以便于洗掉结合不牢固的包被物,防止在实验中影响实验结果;封闭后一定不要洗涤,封闭的目的就是要靠蛋白填补未被包被物占领的空间,另外封闭液一般也具有保护作用。
如果不是用biotin-avidin系统的话,用5%脱脂奶粉做封闭液就可以了,廉价,效果也很好。
封闭液一般是用5%的BSA或者是用5%的脱脂奶粉,溶剂一般使用TBST。做实验的时候,我一直强调这样的一个原理,那就是在了解原理的基础之上,我们完全可以不拘泥于书本,进行创造。就拿这个封闭液来讲,要是单纯的一种封闭效果仍然不好的话,我们完全可以两种合用,我就试过1%的BSA和5%的脱脂奶粉合用进行封闭的事例。所以,搞科学研究是需要我们进行再创造的。
D、BSA交联抗原注射到兔子体内得到一抗,我们Elisa的二抗用的是羊抗兔HRP标记的二抗。请问,在封闭时,用什么样的封闭液比较好呢?是无蛋白封闭液,还是羊的免疫前血清?
㈥ western牛奶封闭液怎么配
推荐用TBST进行稀释获得5%的牛奶封闭液(5g/100mL)。
拓展:
一、牛血清白蛋白(BSA),又称第五组分,是牛血清中的一种白蛋白,包含583个氨基酸残基,分子量为66.430 kDa,等电点为4.7。牛血清白蛋白在生化实验中有广泛的应用,例如在western blot中作为Blocking agent;在酶切反应缓冲液中加入BSA,通过提高溶液中蛋白质的浓度,对酶起保护作用。防止酶的分解和非特异性吸附,能减轻有些酶的变性,能减轻有些不利环境因素如加热,表面张力及化学因素引起的变性。
二、用途说明
1、 在酶切反应缓冲液中加入BSA,通过提高溶液中蛋白质的浓度,对酶起保护作用。防止酶的分解和非特异性吸附,能减轻有些酶的变性,减轻不利环境因素如加热,表面张力及化学因素引起的变性的。
2 、ELISA中也常常用到,比如封闭液,样本稀释液,酶结合物稀释液都可以用BSA。
3、生化研究,遗传工程和药物研究。
㈦ 10%的牛血清白蛋白 (BSA)怎么配置
10gBSA+100ml水
按比例改