酸性固体培养基怎么配置

‘壹’ 配置培养基的原则有哪些

配置培养基的原则有：

1、选择适宜的营养物质：

所有微生物生长繁殖均需要培养基含有碳源、氮源、无机盐、生长因子、水及能源，但由于微生物营养类型复杂，不同微生物对营养物质的需求是不一样的，因此首先要根据不同微生物的营养需求配制针对性强的培养基。

2、营养物质浓度及配比合适：

培养基中营养物质浓度合适时微生物才能生长良好，营养物质浓度过低时不能满足微生物正常生长所需，浓度过高时则可能对微生物生长起抑制作用。

3、控制pH条件：

培养基的pH必须控制在一定的范围内，以满足不同类型微生物的生长繁殖或产生代谢产物。各类微生物生长繁殖或产生代谢产物的最适pH条件各不相同，一般来讲，细菌与放线菌适于在pH7-7.5范围内生长，酵母菌和霉菌通常在pH4.5-6范围内生长。

4、控制氧化还原电位：

不同类型微生物生长对氧化还原电位(F)的要求不一样，一般好氧性微生物在F值为+0.1V以上时可正常生长，一般以+0.3一+0.4V为宜，厌氧性微生物只能在F值低于+0.1V条件下生长，兼性厌氧微生物在F值为+0.1V以上时进行好氧呼吸，在+0.1V以下时进行发酵。

5、原料来源的选择：

在配制培养基时应尽量利用廉价且易于获得的原料作为培养基成分，特别是在发酵工业中，培养基用量很大，利用低成本的原料更体现出其经济价值。

6、灭菌处理：

要获得微生物纯培养，必须避免杂菌污染，因此对所用器材及工作场所进行消毒与灭菌。对培养基而言，更是要进行严格的灭菌。

(1)酸性固体培养基怎么配置扩展阅读：

液体培养基：80%～90%是水，其中配有可溶性的或不溶性的营养成分的培养基。

固体培养基：一类配制成的固体状态的基质。根据性质又分为固化培养基、非可逆性固化培养基、天然固态培养基、滤膜。

半固体培养基：指在液体培养基中加入少量的凝固剂而配制成的半固体状态的培养基。

脱水培养基：又称预制干燥培养基，指含有除水分外的一切成分的商品培养基。

特殊培养基：

1、选择性培养基：选择性培养基是指根据某种微生物的特殊营养要求或其对某化学、物理因素的抗性而设计的培养基。其功能是使混合菌样中的劣势菌变成优势菌，从而提高该菌的筛选效率。

2、酵母菌富集培养基：葡萄糖5%，尿素0.1%，硫化铵0.1%，磷酸二氢钾0.25%，磷酸氢二钠0.05%，七水合硫酸镁0.1%，七水合硫酸铁0.01%，酵母膏0.05%，孟加拉红0.003%，pH4.5。

3、Ashby无氮培养基：富集好氧自生固氮菌，甘露醇1%，磷酸二氢钾0.02%，七水合硫酸镁0.02%，氯化钠0.02%，二水合硫酸钙0.01%，碳酸钙0.5%。

培养基在使用前通过高压或过滤灭菌。防止污染应该注意以下事项：

1、确认工作细胞库是否被污染，确认毒种工作种子批是否被污染，确认所用培养基及其添加成分是否被污染，均可用细菌、真菌及支原体无菌试验来确认并排除。同时要对无菌试验培养基的灵敏度进行验证。实际生产中，可以从配制好的培养液中取少量加入营养琼脂于恒温培养箱内培养，48小时即可观察有无污染。

2、其它：高压灭菌设备、过滤除菌设备均应进行验证，确保灭菌和除菌效果;前者应在投产前及其后的每6个月进行验证，后者应在每次除菌前、后进行验证工作(至少应在除菌后进行一次)。

3、另外，应将有毒区与无毒区严格分开，并有各自独立的空气净化系统及孵室，有毒区对无毒区应保持相对负压，防止病毒对培养细胞(尤其是细胞库)的污染。

‘贰’ 固体培养基的制备

固体培养基的制备：

1、称取

用精确度1/100的电子天平称取培养基所需药品。先根据配方计算出配置一定量培养基所需的各种成分药品的量，然后用天平准确称取。称量时用称量纸折叠成簸箕状盛放药品。称量纸的折叠方法。

6、灭菌

分装好的培养基应立即进行灭菌。

7、倒平板

灭菌溶化的培养基冷却到50℃左右后，倒入无菌干燥的培养皿中。培养基的温度不能过高，否则容易在培养皿的内盖上形成太多的冷凝水；温度太低，培养基又容易凝固成块，无法制成平板。

倒平板时，应在靠近酒精灯火焰进行，以免外界的杂菌落入平板内，左手拿培养皿，右手拿三角瓶的底部，用左手的小指和手掌部位把三角瓶的棉塞拔下，灼烧瓶口，用大拇指和食指把培养皿盖打开一条缝，至瓶口刚好伸入，倒入培养基，以铺满底为限，不超过培养皿高度的三分之一，迅速盖好盖，放在桌面上，轻轻地转动培养皿，使培养基分布均匀，冷凝后即可。

8、摆斜面

装在试管中的琼脂培养基，在灭菌完成后，趁热立即摆放在木棒（或玻璃棒）上，并完成适时地斜度，冷却后，琼脂凝固即成斜面。斜面长度不要超过试管的二分之一。

9、质量检查

培养基灭菌后应仔细检查一遍，发现有破裂、水分浸入、色泽异常、棉塞被培养基沾染，都要丢弃，不能再用。并测定其最终pH。

还需要进行无菌检查和效果检查。无菌检查是将灭菌后的培养基取1管（瓶）~2管（瓶），37℃恒温培养1d~2d，确定无杂菌生长；效果检查是用标准菌种接种在相关的培养基上检查菌的生长、形态及生化情况，与已知情况相符。两种情况都合格，配制的培养基方可使用。