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封閉的bsa用什麼配置

發布時間: 2022-06-28 05:20:10

A. western 抗體封閉用的bsa是五組份嗎

western抗體封閉用的BSA是5%的
而且不是所有的抗體封閉都是需要BSA,只有如果是磷酸化抗體才最好用5%BSA封閉
因為脫脂奶粉含有酪蛋白,該蛋白本身就是一種磷酸化蛋白,使用脫脂奶粉會結合磷酸化抗體
一般western抗體封閉都是用脫脂奶粉就可以了
只有磷酸化抗體才最好用5%BSA封閉

B. 免疫熒光用什麼封閉比較好

BSA可以用來封閉,網上查到的濃度0.5%到2%都有,1%比較常見。

孵育一抗之前要加,封閉孵育時間過後,加一抗之前不要洗掉,只移除多餘液體即可.之後不需要再封閉,但是一抗和二抗都應該用含有BSA的緩沖液來稀釋。有些人還加tween來減少非特異性結合。

封閉抗原也可以使用二抗抗體所屬動物種類的血清.沒有統一固定的濃度要看情況。

用試劑盒則有自帶的封閉試劑,效果更穩定有保障。

免疫染色實驗一個重要特點就是最佳條件都是試出來的,每換一個抗體條件都可能需要調整。所以最好的辦法是用生產商測試過的實驗方法。寫個郵件問一下,就這么簡單。

C. 封閉用BSA是現配還是可以多次用啊

最好是現配現用。如果確實要提前,可以存放4度,但也會很快長菌。如果加防腐劑,可能對實驗結果會有影響。

D. 做WB為什麼用牛奶封閉能顯出來 用BSA就顯不出來了

在蛋白印跡 WB 實驗的封閉環節,我們經常疑惑該用脫脂牛奶還是牛血清白蛋白(BSA)來封閉,這兩種封閉稀釋液對實驗有什麼影響?

首先,我們需要了解封閉的目的:減少因非特異性結合而產生的背景。其次,我們需要知道 BSA 和牛奶的區別:BSA 僅由一種蛋白組成,即 60 kDa 的牛血清白蛋白;而牛奶則由許多大小不一的蛋白構成。

所以,CST (Cell Signaling Technology) 推薦牛奶封閉最佳,因為牛奶有更大的機會來減少更多的非特異性結合。我們建議您用經 TBST 稀釋的 5% 牛奶,在室溫下搖晃一小時,來封閉CST所有非偶聯一抗,這包括磷酸化特異性和總抗體。

現在,曾有同學問過,「牛奶中的磷酸酶會怎麼樣?」 或許有一些文章反對使用牛奶來檢測磷酸化信號,這一誤區的出現可能是由於實驗者使用了非實驗級奶粉引起的(國內許多奶粉含有磷酸酶等雜質),但在 CST 的所有內部檢測中,科學家們進行了多次蛋白印跡實驗,從未發現任何這樣的問題。CST建議轉膜後迅速在TBS中洗滌膜幾秒,以便移除殘留的轉膜緩沖液,隨後使用5%脫脂牛奶(請使用實驗級的#9999)的TBST室溫封閉1h。另外,CST科學家們每天至少要新鮮配製一次牛奶,有時甚至一天配製多次,因為如果牛奶緩沖液放置了一周、兩周甚至更長時間不使用,那麼磷酸酶影響信號的機率將會增加。

上圖是(Phospho-Akt (Thr308) (D25E6) XP® Rabbit mAb) #13038 用來檢測經 PDGF 處理的 3T3 細胞裂解物的結果圖片。左側膜是用牛奶封閉,右側膜用 BSA 封閉。顯然,用 BSA 封閉的膜的背景更高。但用牛奶封閉膜時,磷酸化信號仍然很強且清晰。

封閉後,請仔細查看一抗的說明書,根據推薦的一抗緩沖液來稀釋一抗,一般推薦牛奶或 BSA,但取決於不同抗體。

E. 蛋白標准品怎麼配

你的標准品是BSA嗎?
BSA是固體,可以配置成不同濃度的.
如果你的標准品BSA配置成1mg/ml的
那你每個孔濃度就是0mg/ml,0.25mg/ml,0.5mg/ml,0.75mg/ml,1mg/ml

F. western blot 封閉時什麼時候用脫脂奶什麼時候用BSA

做磷酸化蛋白一般不用脫脂奶,因為脫脂奶中有磷酸化蛋白,會使背景加深。其他時候一般BSA和脫脂奶通用就好了
根據經驗來說,如果strip液洗過的,用脫脂奶感覺封閉的好一點

G. 細胞免疫熒光中固定的封閉液bsa是用什麼稀釋

可以直接用0.02M的PBS
配製封閉液封閉後不用PBS 清洗干凈再浸一抗了
如果BSA 濃度是否太高,會導致最常用的封閉劑是0.05%-0.5%的BSA,封閉是否必要,取決於ELISA的模式及具體的實驗條件。並非所有的ELISA 固相均需封閉,封閉不當反而會使陰性本底增高。一般說來,雙抗體夾心法,只要酶標記物是高活性的,操作時洗滌徹底,不經封閉也可得到滿意的結果。特別是用單抗腹水直接包被,因其中大量非抗體蛋白在包被時同樣也吸附在固相表面,業已起到了類似封閉劑的作用。但在間接法測定中,封閉一般是不可少的!希望能幫到你,請採納。

H. 作為wb封閉劑的bsa是什麼等級的

推薦用TBST進行稀釋獲得5%的牛奶封閉液(5g\/100mL)。 很多人的經驗是:脫脂牛奶封閉後背景比較干凈,而檢測磷酸化蛋白則用BSA(因脫脂牛奶含有較多的磷酸化蛋白,會干擾的)9991

I. BSA蛋白含量一般是多少

這個問題不具體,很難回答啊.
BSA本身就是一種蛋白,它的濃度就是它的含量.
如果假設你這個問題是這么問的:
抗體中,一般BSA蛋白的含量是多少?為了保護蛋白,通常會加入0.1%-1%,或者2mg/ml-15mg/ml的BSA作為保護蛋白,防止抗體降解
進行WB或其他免疫實驗室,封閉液中BSA的含量是多少?通常1-5%的BSA會用於制備封閉液
蛋白定量時,標准品BSA的含量是多少?因為BSA要用於製作標准曲線,因此根據樣品濃度,設置濃度梯度配溶液就好了.

J. 求封閉液中1%的BSA是怎麼配製

這個最好用純度高的。所謂封閉液的作用就是封閉掉任何有非特異性蛋白的結合位點。其實BSA並不是最佳的封閉選擇,非特異性的IgG,或者Fc端判斷才是,可以封閉掉非特異性的Fc結合位點,減少假陽性。但是考慮到價格的因素

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