增強子資料庫
① 如何用生物信息學方法預測增強子
增強子及其生物信息學預測
真核生物基因表達調控是當代分子生物學研究的重要課題之一。增強子是主要的真核生物基因表達調控的順式作用元件,能有效促進基因表達。因此,增強子的相關研究是當今分子生物學研究的重點之一。運用生物信息學方法具有方便、快捷以及成本低等優勢,這使得生物信息學成為當代分子生物學研究的重要工具。本文簡單綜述了增強子相關研究進展和採用生物信息學策略對序列保守性增強子進行預測和定位的幾個常用資料庫和具體方法。
② 如何用電腦軟體繪制質粒圖譜
一個合格質粒的組成要素 復制起始位點Ori,即控制復制起始的位點。原核生物DNA 分子中只有一個復制起始點。而真核生物DNA 分子有多個復制起始位點。 抗生素抗性基因:可以便於加以檢測,如Amp+ ,Kan+ 多l 克隆位點:MCS 克隆攜帶外源基因片段 P/E:啟動子/增強子 Terms:終止信號 加poly(A)信號:可以起到穩定mRNA 作用 。
二、如何閱讀質粒圖譜
第一步:首先看Ori 的位置,了解質粒的類型(原核/真核/穿梭質粒) Ori 的箭頭指復制方向,其他元件標注的箭頭多指轉錄方向(正向)。
第二步:再看篩選標記,如抗性,決定使用什麼篩選標記:
(1)Ampr:水解β -內醯胺環,解除氨苄的毒性。
(2)tetr :可以阻止四環素進入細胞。
(3)camr:生成氯黴素羥乙醯基衍生物,使之失去毒性。
(4)neor(kanr):氨基糖苷磷酸轉移酶,使G418(卡那黴素衍生物)失活。
(5)hygr:使潮黴素β 失活。
第三步:看多克隆位點(MCS)。它具有多個限制酶的單一切點,便於外源基因的插入。如果在這些位點外有外源基因的插入,會導致某種標志基因的失活,而便於篩選。決定能不能放目的基因以及如何放置目的基因。
第四步:再看外源 DNA 插入片段大小。質粒一般只能容納小於10Kb 的外源DNA 片段。
③ 怎麼知道一個基因是否在某一腫瘤細胞中表達
人類結構基因4個區域:①編碼區,包括外顯子與內含子;②前導區,位於編碼區上游,相當於RNA5』末端非編碼區(非翻譯區);③尾部區,位於RNA3』編碼區下游,相當於末端非編碼區(非翻譯區);④調控區,包括啟動子和增強子等。基因編碼區的兩側也稱為側翼順序