高效液相色譜法中流動相如何配置

㈠ 高效液相色譜法中的樣品和流動相在使用前需要注意什麼

高效液相色譜儀的流動相選擇時應注意： 1、盡量使用高純度試劑作流動相，防止微量雜質長期積累而損壞色譜柱和使檢測器雜訊增加。 2、避免流動相與固定相發生作用而使柱效下降或損壞柱子，如使固定液溶解流失、酸性溶劑破壞氧化鋁固定相等。 3、樣品在流動相中應有適宜的溶解度，防止產生沉澱沉積在柱中。 4、流動相應滿足檢測器的要求。當使用紫外檢測器時，流動相不應有紫外吸收。

㈡ 高效液相時流動相怎麼選擇 濃度一般是多少

大部分的液相都是反相色譜柱（如C18，即十八烷基硅膠鍵合柱），大部分的反相色譜流動相都是水-甲醇或者乙腈-甲醇。
有些物質易溶於水，有些物質易溶於甲醇和乙腈。比例要看物質的溶解程度，如，物質A用水-甲醇（90：10）溶劑中溶解，那麼用水-甲醇（90：10）基本可以沖出來。物質B在水-甲醇（90：10）不溶解，那麼就沖不出來。

為了根據特定物質吸收，會往水中加一些緩沖鹽，比如磷酸二氫鉀，磷酸氫二鉀等。比如磷酸二氫鉀水溶液0.025mol/L。有時會調節流動相的酸鹼性，或者是加入其它的試劑，如離子對試劑什麼的。這要看物質結構，有時要根據官能團判斷。

㈢ 高效液相中流動相的配比，怎樣計算呢

准備兩個瓶子，一個裝甲醇一個裝水，裝甲醇的瓶子隨便裝多少都行，體積無要求，裝水的瓶子水和醋酸比例按照61:4 來，然後設置梯度，35：65（在儀器里設置）

㈣ 葯典上高效液相色譜法測定黃柏的流動相怎麼配啊

單泵，雙泵都可以的。
單泵時：假如你配100ml，先配0.1%磷酸的溶液50ml，加入十二烷基磺酸鈉0.1克混勻，最後加入50ml乙腈。
雙泵時：A泵為純乙腈，B泵為溶於0.1%磷酸的溶液中的十二烷基磺酸鈉。
因為十二烷基磺酸鈉易溶於水，所以最好先在水中溶解後再加乙腈。

㈤ 高效液相色譜法流動相如何設置比例

1、流動相對樣品具有一定的溶解能力，保證樣品組分不會沉澱在柱中(或長時間保留在柱中)。

2、流動相與樣品不產生化學反應。

3、流動相的黏度要盡量小，以便得到好的分離效果；降低柱壓降，延長泵的使用壽命(可運用提高溫度的方法降低流動相的黏度)。

4、流動相的物化性質要與使用的檢測器相適應。如使用UV檢測器，最好使用對紫外吸收較低的溶劑配製。

5、流動相沸點不要太低，否則容易產生氣泡，導致實驗無法進行。

液相色譜是樣品組分在柱填料與流動相之間質量交換而達到分離的目的，因此要求流動相具備以下的特點：

（1）流動相對樣品具有一定的溶解能力，保證樣品組分不會沉澱在柱中(或長時間保留在柱中)。

（2）流動相與樣品不產生化學反應

（3）流動相的黏度要盡量小，以便得到好的分離效果；降低柱壓降，延長泵的使用壽命(可運用提高溫度的方法降低流動相的黏度)。

（4）流動相的物化性質要與使用的檢測器相適應。如使用UV檢測器，最好使用對紫外吸收較低的溶劑配製。

（5）流動相沸點不要太低，否則容易產生氣泡，導致實驗無法進行。

（6）在流動相配製好後，一定要進行脫氣。除去溶解在流動相中的微量氣體既有利於檢測，還可以防止流動相中的微量氧與樣品發生作用

㈥ 高效液相色譜法配流動相需要注意什麼

就是按照標准配製就好了。
如果調解pH值的話，注意pH值按照標准上下不要超過0.05

另外流動相配製完成之後需要減壓抽濾，然後超聲10-15min，為的是脫氣。防止氣體進入儀器，色譜柱和檢測器。

㈦ 高效液相色譜儀流動相選擇應該遵循什麼樣的原則

1．流動相的性質要求
一個理想的液相色譜流動相溶劑應具有低粘度、與檢測器兼容性好、易於得到純品和低毒性等特徵。
選擇流動相時應考慮以下幾個方面：

①流動相應不改變填料的任何性質。低交聯度的離子交換樹脂和排阻色譜填料有時遇到某些有機相會溶脹或收縮，從而改變色譜柱填床的性質。鹼性流動相不能用於硅膠柱系統。酸性流動相不能用於氧化鋁、氧化鎂等吸附劑的柱系統。

②純度。色譜柱的壽命與大量流動相通過有關，特別是當溶劑所含雜質在柱上積累時。

③必須與檢測器匹配。使用UV檢測器時，所用流動相在檢測波長下應沒有吸收，或吸收很小。當使用示差折光檢測器時，應選擇折光系數與樣品差別較大的溶劑作流動相，以提高靈敏度。

④粘度要低（應<2cp）。高粘度溶劑會影響溶質的擴散、傳質，降低柱效，還會使柱壓降增加，使分離時間延長。最好選擇沸點在100℃以下的流動相。

⑤對樣品的溶解度要適宜。如果溶解度欠佳，樣品會在柱頭沉澱，不但影響了純化分離，且會使柱子惡化。

⑥樣品易於回收。應選用揮發性溶劑。

2．流動相的pH值

採用反相色譜法分離弱酸（3≤pKa≤7）或弱鹼（7≤pKa≤8）樣品時，通過調節流動相的pH值，以抑制樣品組分的解離，增加組分在固定相上的保留，並改善峰形的技術稱為反相離子抑制技術。對於弱酸，流動相的pH值越小，組分的k值越大，當pH值遠遠小於弱酸的pKa值時，弱酸主要以分子形式存在；對弱鹼，情況相反。分析弱酸樣品時，通常在流動相中加入少量弱酸，常用50mmol/L磷酸鹽緩沖液和1%醋酸溶液；分析弱鹼樣品時，通常在流動相中加入少量弱鹼，常用50mmol/L磷酸鹽緩沖液和30mmol/L三乙胺溶液。

註：流動相中加入有機胺可以減弱鹼性溶質與殘余硅醇基的強相互作用，減輕或消除峰拖尾現象。所以在這種情況下有機胺（如三乙胺）又稱為減尾劑或除尾劑。

流動相選擇方法
1：由強到弱： 一般先用90%的乙腈(或甲醇)/水(或緩沖溶液)進行試驗，這樣可以很快地得到分離結果，然後根據出峰情況調整有機溶劑(乙腈或甲醇)的比例。
2： 三倍規則 ：每減少10%的有機溶劑(甲醇或乙腈)的量，保留因子約增加3倍，此為三倍規則。這是一個聰明而又省力的辦法。調整的過程中，注意觀察各個峰的分離情況。
3： 粗調轉微調：當分離達到一定程度，應將有機溶劑10%的改變數調整為5%，並據此規則逐漸降低調整率，直至各組分的分離情況不再改變。

㈧ 高效液相色譜儀流動相如何配置

水是純水，這只是一個比例，也就是3比1，沒有什麼大的要求。配好以後，抽濾一下（用0.22微米，也有用0.25微米的膜），但我也見過不過濾的。如果有條件還是過濾一下，有的檢測器對氣泡還是比較敏感的，也有利於儀器的保護。

㈨ 高效液相色譜的流動相如何選擇需考慮哪些因素

由於高效液相色譜中流動相是液體，它對組分有親和力，並參與固定相對組分的競爭。因此，正確選擇流動相直接影響組分的分離度。對流動相溶劑的要求是：
（1）溶劑對於待測樣品，必須具有合適的極性和良好的選擇性。
（2）溶劑要與檢測器匹配。對於紫外吸收檢測器，應注意選用檢測器波長比溶劑的紫外截止波長要長。所謂溶劑的紫外截止波長指當小於截止波長的輻射通過溶劑時，溶劑對此輻射產生強烈吸收，此時溶劑被看作是光學不透明的，它嚴重干擾組分的吸收測量。可以在網上搜索一下溶劑的紫外截止波長。
對於折光率檢測器，要求選擇與組分折光率有較大差別的溶劑作流動相，以達最高靈敏度。
（3）高純度。由於高效液相靈敏度高，對流動相溶劑的純度也要求高。不純的溶劑會引起基線不穩，或產生「偽峰」。痕量雜質的存在，將使截止波長值增加50～IOOnm。
（4）化學穩定性好。不能選與樣品發生反應或聚合的溶劑。
(5)低粘度。若使用高粘度溶劑，勢必增高壓力，不利於分離。常用的低粘度溶劑有丙酮、乙醇、乙晴等。但粘度過於低的溶劑也不宜採用，例戊烷、乙醚等，它們易在色譜柱或檢測器內形成氣泡，影響分離.

㈩ 高效液相配製流動相0.05mol甲醇如何配置

甲醇密度是0.79，分子量32。0.05mol=1.6g
,
方法一:你可以利用天平燒杯稱取1.6g的甲醇溶於1L的水。也可以稱取16g甲醇溶於1L水作為10倍儲存液，然後取100ml稀釋成1L。
方法二：1.6g個甲醇就是1.26毫升。那麼你可以用移液器量出1.26ml然後用水定容到1L。也可量出12.6ml定容到1L作為10倍儲存液，使用前稀釋。
方法三：配置25%甲醇溶液，為20倍儲存液，取儲液50ml定容到1L