固態多聚甲醛如何配置

❶ 化學問題 多聚甲醛 水合氯醛 的詳細配製方法 緊急！！！！！！

4%多聚甲醛-0.1mol/L磷酸緩沖液（pH7.3）:
該固定劑較適於光鏡免疫細胞化學研究，最好是動物經灌注固定取材後，繼續浸泡固定2～24h。另外，該固定劑較為溫和，適於組織標本的較長期保存。
試劑：多聚甲醛
40g
0.1mol/L磷酸緩沖液
至1000ml
配製方法：稱取40g多聚甲醛，置於三角燒瓶中，加入500～800ml
0.1mol/L磷酸緩沖液（Phosphate
Buffer以下簡稱PB），加熱至60℃左右，持續攪拌（或磁力攪拌）使粉末完全溶解，通常需滴加少許1n
NaOH才能使溶液清亮，最後補足0.1mol/L的PB於1000ml，充分混勻。
4%多聚甲醛-磷酸二氫鈉/氫氧化鈉:
該固定劑適於光鏡和電鏡免疫細胞化學研究，用於免疫電鏡時，最好加入少量新鮮配製的戊二醛，使其終濃度為0.5%～1%。該固定劑較溫和，適於組織的長期保存。組織標本於該固定液中，4℃冰箱保存數月仍可獲得滿意的染色效果。
試劑：A液：多聚甲醛
40g
蒸餾水
400ml
B液：Na2HPO4·2H2O
16.88g
蒸餾水
300ml
C液：NaOH
3.86g
蒸餾水
200m
配製方法：A液最好在500ml的三角燒瓶中配製（方法同前），至多聚甲醛完全溶解後冷卻待用。注意，在溶解多聚甲醛時，要盡量避免吸入氣體或濺入眼內。B液和C液配製好後，將B液倒入C液中，混合後再加入A液，以1n
NaOH或1N
HCl
將pH調至7.2～7.4，最後，補充蒸餾水至1000ml充分混合，4℃冰箱保存備用。--------------------------------------------------------------水合氯醛試液:取水合氯醛50g，加水15ml與甘油10ml使溶解，即得。---------------------------------------------------------------------具體還是去查文獻比較好，畢竟用途不一樣，配置方法會有差異

❷ 甲醛溶液的配置

甲醛溶液配製：

取10ug/L注甲醛溶液10mL加入1L容量瓶中加入蒸餾水定容得到1ug/L甲醛溶液。

取1ug/L甲醛溶液10mL加入1L容量瓶中加入蒸餾水定容得到0.1ug/L甲醛溶液。

取7個50mL容量瓶分別按下表加入0.1 ug/L甲醛溶液和蒸餾水，得到下表所示濃度的甲醛溶液。

 (2)固態多聚甲醛如何配置擴展閱讀

甲醛分子結構中存在羰基氧原子和α—氫原子，化學性質很活潑，它能與許多化合物進行反應，生成許多重要的工業化學品和化工中間體，這里僅介紹其中最重要的一些化學反應。

甲醛易溶於水，溶解過程系放熱反應，熱量大小不取決於溶液的濃度。甲醛水溶液系無色透明液體，有強烈刺激氣味，沸點基本上不隨其溶液濃度的改變而變化。

在標准或當地大氣壓下，含甲醛55%（wt.）以下的甲醛水溶液其沸點在99℃～100℃之間。25%（wt.）甲醛水溶液的沸點為99.1℃，而35%（wt.）甲醛水溶液的沸點為99.9℃。

❸ 如何用多聚甲醛制備福爾馬林溶液

多聚甲醛質量分數一般在93%以上，按照含甲醛 40%比例，溶於熱水中即可

❹ 4%多聚甲醛應該怎麼配置

4%多聚甲醛是常用固定液，4%指的是最終的質量體積比，因此，應該是定容至1 L。如果加液1 L，40 g PFA溶入後體積稍有增加，得到的實際濃度略小於4%，但固定液的濃度要求並不是非常精確，這點濃度變化常常不會對固定效果產生影響。

❺ 大鼠腦灌流用什麼甲醛

網上查閱相關資料，自己匯總，整理出來，與大家分享。馬上進行灌注取腦，祝我順利。
用途：
1.用於常規HE染色，免疫組化分析。
2.冰凍切片可以不做腦組織固定。
3.不可用於western blot和PCR。
4.如果觀察腦組織的缺血、損傷或其它病變時，不作灌注固定，而是在取出腦組織後作固定，將大大影響效果。
原理：
心臟灌流術能夠快速沖凈血液並在動物死亡前進行組織的前固定,避免了組織的自溶現象,是腦組織切片觀察的常用方法。多聚甲醛使組織蛋白發生交聯，以保持蛋白的原位和表面結構不變，從而能使其對應的抗體准確檢測其表達位置和量。
必要性：
1.腦組織較軟，且細胞成分不易保留，腦組織是較易軟化的組織之一，血供也較為豐富，所以最好是在取腦組織前用4％多聚甲醛灌注固。
2.經前固定後，取腦操作時，可減少腦組織損傷。
3.腦內血液都在，HE染色後，可去除紅細胞背景影響。
大鼠灌注取腦標准操作規程(SOP)：
流程：
1)麻醉 2)開胸 3)心臟左心室穿針,剪開右心耳 4)生理鹽水沖水 5)4%多基甲醛固定 6)取腦 7)保存或切片.
具體過程：
大鼠經深度麻醉後，固定於自製的手術木板上,置於解剖盤中,開胸暴露並游離出心臟,經左心室插入灌流針並固定, 切開右心耳,先灌注冰凍無菌生理鹽水(4℃)XmL，直到肝和肺臟顏色轉白及右心房流出液澄清,後再灌注冰凍(4℃)4%多聚甲醛XmL,斷頭取腦,多聚甲醛浸泡固定24小時。
Tips：
1.多聚甲醛的配置：
一般方法為：4％多聚甲醛PBS緩沖液配法：稱取40g PFA溶於裝有500mlDEPC水的玻璃容器（燒杯或燒瓶）中，持續加熱磁力攪拌至60～65℃，使成乳白色懸液。用1.0mol/L的NaOH值至7.4，使呈清亮狀（滴加），再加入約500ml PBS，充分混勻（在冰浴或冷水浴中），可再檢測一下pH，過濾後定容至1000ml，室溫或4℃保存備用。
簡便方法：先配好PBS，稱好相應的多聚甲醛，37℃水浴或溫箱密封放置2天，就能全溶。若是很急，55℃水浴一天，期間不時震盪。注意，4%的多聚甲醛需臨用前配製,配製後需過濾去除小的雜質,避免心臟灌流時造成栓塞影響灌流效果。
2.製作灌注裝置，用兩瓶塑料包裝的輸液瓶裝灌注液。同時配好輸液器備用。
3.10％水合氯醛按4mL/100g的劑量腹腔注射麻醉動物。
4.沿兩側肋弓剪開皮膚，打開腹腔，用一血管鉗夾持劍突並向上提拉，用彎剪在膈肌與胸骨柄相連處剪一小口，造成人工氣胸，然後向兩側順延，剪斷膈肌及肋骨，夾持劍突的血管鉗將劍突連帶胸廓上翻固定，充分暴露心臟，直視下穿刺針左心室心尖處，用血管鉗固定。
5.快速滴注生理鹽水(室溫)，同時剪開右心耳。約注入100~150mL，至流出液體血色較淺基本澄清，停止灌注。肝臟、眼珠、爪子迅速變白是排出血液的有效觀察指標。
6.繼續用4%多聚甲醛灌流250ml固定。
7.後固定：灌流後的腦組織置於4％PFA置4度冰箱內進行後固定，時間>2h，過夜最好。
補充：
還有一種省時省劑的方法。
夾閉腹主動脈：只灌註上肢及頭腦，固定的好又快，又省試劑。先灌注生理鹽水約100ml，見到老鼠兩前肢及兩肺變白可改灌注多聚甲醛。多聚甲醛用100ml以下即可。
灌注成功的標志：剛開始灌注時老鼠前肢劇烈抽動（下肢不抽動證明腹主動脈夾閉完全）；前肢及頸部僵硬；所灌注的腦組織白而硬。
注意事項：
1.多聚甲醛氣味刺激，配置時做好自我保護。
2.暴露心臟這一步驟，容易損傷肺、心臟或者肝臟，「夾持劍突並向上提拉，用彎剪在膈肌與胸骨柄相連處剪一小口，造成人工氣胸」，人工氣胸後，肺萎縮，胸腔里的空間增大，提拉劍突後，不容易損傷肺、心及肝臟，出血少。
3.經心臟灌注，有時穿刺針會誤進右心室，那樣灌注主要在肺循環起作用，體循環的血液影響不大。所以觀察將穿刺針插入到主動脈內可以確保起到體循環灌注沖洗血液的效果，腦組織的血液沖干凈後，才不會影響免疫組化的效果，不然到處都是紅細胞造成的背景染色。
4.灌注時注意排空輸液管中的氣泡不然容易氣栓，影響灌注效果。一定要看到大鼠較劇烈抽搐，不然證明灌注不好。
5.關於生理鹽水的溫度的選擇，有人認為因為是快速沖刷血管里的血液，低溫造成血管收縮，灌注的效果反而沒有室溫的好。但是用低溫的認為，低溫有利於組織完整。
6.灌注成功的標志：剛開始灌注時老鼠劇烈抽動；成功後老鼠後肢綳直，尾部豎起成一直線；所灌注的腦組織白而硬。
7.去顱骨後腦表面有一層硬腦膜,要去掉。
常見問題：
1.灌注取腦不可用於Western blot及PCR的原因。
答：多聚甲醛使組織蛋白發生交聯，以保持蛋白的原位和表面結構不變，從而能使其對應的抗體准確檢測其表達位置和量。
Western中，要用去污劑使各種蛋白發生變性、解聚，並變成統一的線性肽鏈，從而能夠用凝膠電泳進行分子量的梯度分離。多聚甲醛會影響蛋白的解聚，從而使其無法用凝膠分離。
另外，WB和免疫組化所使用抗體的抗原表位也不同，WB的抗體一般識別蛋白的一級結構，所以可能也無法識別甲醛處理的蛋白。
PCR要提RNA，RNA非常容易降解，必須新鮮取組織，然後盡快超低溫冷藏或者馬上抽提，否則非常容易降解。灌注固定的組織，原則上是能夠提得出DNA和RNA的，但是肯定會有較多的降解，一般不會這樣做。
2. 沒有灌注固定的大鼠腦組織,能不能做切片和免疫組化？
答：如果沒有灌注固定，而是直接取材然後放入固定液中，可以進行免疫組化染色，只是效果不如灌注固定的好，尤其是要做電鏡時更明顯。有的標記蛋白要求較高，固定不好就難以染好。
3. 用4%多聚甲醛固定但保存了2周才做石蠟切片，不知對免疫組化有無影響？
答：固定時間過長蛋白多肽鏈都交連在一起了,抗原性就很弱了，很可能沒有陽性結果,抗原修復時一般的修復很難把抗原性恢復. 可能會有影響，但不會太大。固定時間長，抗原修復時間也要長一些。
4.灌注多長時間？灌注液多少？
看了很多經驗，每個人的灌注液用量都不一樣，灌注速度也能沒有很清楚的說法，灌注時間也不確定。我的總結為，還是看灌注成功的標志。現將看到的比較詳細的處理方法列出。灌注速度，大家比較公認的是先快後慢。
短期灌註：採用心臟穿刺快速灌注20 min,其中生理鹽水灌注50~100mL,4 %多聚甲醛緩沖液灌注150 mL。
長期灌註：灌注時間延長到1 h,其中生理鹽水灌注200mL,4 %多聚甲醛緩沖液灌注400 mL。
短期灌注組腦組織結構保留基本良好,與長期灌注組相比稍差,研究皮層和海馬結構損傷基本可以滿足;長期灌注組結構保留最好,但是耗時長、固定液用量大,致使試驗進度慢等缺點不容忽視。,對皮層和海馬缺血再灌注損傷研究選擇短期灌注取腦尚可滿足需要,深部腦白質及核團缺血再灌注損傷研究還是要用長期灌注固定取腦法,或者在取腦後立即根據實驗取材要求將腦切成塊再浸泡入固定液充分固定。
下面是夾閉腹主動脈:
每隻大鼠先快速推注生理鹽水50 ml沖洗,繼而灌注固定液(如4%多聚甲醛等)50~80 ml,先快後慢,需10~15 min,在灌注固定液過程中,頸部逐漸變硬;灌注結束後,開顱取出腦組織,置於固定液中後固定24 h。
5. 體循環與肺循環的鑒別？
體循環時大鼠肝臟變白現象出現較早,在灌注多聚甲醛後,四肢會出現明顯的抽搐現象,尾巴和四肢明顯僵硬。若灌流針誤插入右心室,會導致灌流液沿肺循環途徑灌流,這時肝臟變白出現的較慢,四肢的抽搐現象沒有體循環明顯,且鼻腔中有時會有灌流液流出。因肺循環會影響組織器官的灌流效果,因此進針時要准確,避免肺循環的發生。一旦出現肺循環指征,應及時調整進針角度。
6.適宜的灌注壓？
灌注壓過小,不利於灌注液在組織中的灌流,灌注壓過大,會造成毛細血管和器官組織的損害,不利於組織切片的觀察。一般灌注生理鹽水時灌注壓在20伏左右,快速灌流多聚甲醛時一般在10伏左右,待大鼠四肢出現明顯抽搐後,再緩慢灌流多聚甲醛30min,灌注壓一般在5伏左右。

❻ 4%甲醛是干什麼用的

4%的甲醛溶液實際上指的是10%甲醛溶液，因為甲醛溶液本身含量為39%，一般用水稀釋配成10%的溶液用作組織固定用。習慣上叫10%甲醛溶液，實際上含甲醛量是4%。

4%的多聚甲醛是用PBS溶解固體多聚甲醛配成。

多聚甲醛是固體試劑，甲醛是液體試劑；二者配置方法也不一樣，多聚甲醛需要在加熱的條件下配置，時間很長，溶劑是PBS。甲醛可以直接用H2O稀釋配置而得。

❼ 多聚甲醛固定後組織膨脹的原因

多聚甲醛之所以能夠起到很好的固定效果，和它的製作工藝、物理性質和化學性質是分不開的。
多聚甲醛多製成多聚甲醛固定液來進行固定，多聚甲醛液的配方決定了多聚甲醛的固定性，多聚甲醛液中含有pbs溶液，HCL，這些溶液和多聚甲醛按照一定的方法混合在一起就具有了個定作用。

❽ 求助）組織固定（甲醛，多聚甲醛，配製

我們固定腦組織做免疫組化染色就是這么做的。但是在配置多聚甲醛的時候，由於多聚甲醛很難融解，以般需鹼性條件，並附以溫熱融解。如果直接配成PB＋多聚甲醛，比較難融解。我們是先用蒸餾水配置500ml8％多聚甲醛，融解後加入500ml 0.2 M PB。

❾ 多聚甲醛乾粉固定組織怎麼配置4

使用4%的多聚甲醛可以固定標本不能超過48hours,固定時間太久組織會變脆
如果是在溫度4°以下最多可以放一個月，但是肯定會損失抗原的

❿ 將4%的多聚甲醛溶液稀釋為1%的應該怎麼配置

假設這份4%的溶液為100克，那麼水為96克，甲醛為4克，那麼配置為百分之一的溶液，需加水300克，
同理，假設這份溶液為100x克，那麼水為96X，甲醛味4X克，那麼要配置為百分之一的溶液，因為甲醛味4X克，需要溶液396X克才變為百分之一的溶液，原先有水96x克，那麼虛加入水396x-96x=300x克水