10倍PCR緩沖液如何配置
A. 10 PCR buffer 怎麼配置
10×十二烷基硫酸鈉/甘油凝膠上樣液（室溫貯存）
成分及終濃度 配製10ml溶液各成分用量
0.2％溴酚藍 20mg
0.2％二甲苯青FF 20mg
200 mmol/L EDTA 4ml 0.5mol/L EDTA(pH8.0)
0.1％SDS 100ul 10％ SDS
50％甘油 5ml
補足 水 20mg 到10ml
B. 關於PCR溶液體系的配製
加入量和濃度有關，只要知道每一個要加入物質的濃度就可以算出來了：
模板的體積=25ng/模板的濃度 （這個值需要測定，如果實在不知道模板濃度，就加0.1-0.5ul左右吧）
引物的體積=0.5umol/1000uL * 10uL / 引物濃度 （根據自己配製的情況，有時候可能是100mM或者是200mM）
Taq酶體積= 0.5 U / Taq 酶活力單位濃度（標注在管子上，U/uL表示的數字）
Buffer的量應該是1uL。（這里需要解釋一下，經過確認，沒有1X的buffer，因為如果是1X的話，沒法加了，所以正確的應該是10X的buffer，加入量就是稀釋10倍，所以10uL體系加1uLbuffer）
C. PCR體系怎麼配
PCR Buffer50 mM KCl, 10 mMTris-HCl, 2.5 mMMgCl2, pH 8.3
200μM dNTPs指25ul體系中的dNTPs的終濃度。
0.2 μM invA primers,0.2 μM終濃度的配對鏈引物。
0.2μM sefA primers, 0.2 μM終濃度的自身鏈引物(下游引物)。
and 0.5 μM pefA primers
2.5U of Taq DNA polymerase，2.5U的Taq酶，一般Taq酶都是5U/ul的。
and 0.2μl of DNA template，0.2ul DNA模板。
剩餘的體積用無菌水補足25ul。
(3)10倍PCR緩沖液如何配置擴展閱讀
設計PCR 引物時的一般原則：
1、引物長度- 一般15~ 30鹼基，過短則特異性低; 過長則會引起引物間的退火而影響有
效擴增。
2、 避免內部二級結構，避免序列內有較長的迴文結構，使引物自身不能形成發夾結構。
3、G/C 和A/T 鹼基均勻分布，G/C 含量在45%~ 55% 之間，引物鹼基序列盡可能選
擇鹼基隨機分布，避免嘌呤、嘧啶的連續排列。
4、要避免兩個引物間特別是3' 末端DNA 序列互補以及同一引物自身3' 末端的序列互
補，使它們不能形成引物二聚體或發卡結構。
5、引物3' 端鹼基一般應與模板嚴格配對，並且3' 端為G、C 或T 時引發效率較高。
6、 引物5' 端鹼基可不與模板匹配，可添加與模板無關的序列(如限制性內切酶的識別
位點、ATG 起始密碼子或啟動子序列等)。
D. pcr中鎂離子用什麼稀釋
pcr中鎂離子用什麼稀釋
1. pcr中mg離子的作用
鎂離子濃度一般用量1.5-2.0 mmol/L，Taq DNA聚合酶活性需要Mg 2+。
Mg 2+濃度過低，會顯著降低酶活性。Mg 2+濃度過高又使酶催化非特異性擴增增強。Mg 2+濃度還會影響引物的退火、模板與PCR產物的解鏈溫度，從而影響擴增片段的產率。Takara的mg離子的濃度一般是25mM的，20ul體系我們一般加1.2ul的MgCl2，效果挺好的
2. pcr mgcl2
標準的PCR操作程序是將各種所需反應成分分別加入PCR反應管中，然後根據具體的實驗要求，設置一定的循環參數，進行循環擴增。具體如下：
(1) 向PCR反應管中依次加入
DNA模板 50～300ng (約為102～105拷貝DNA)
引物(3'→5'，5'→3')各 2μl 10μmol/L (終濃度為0.4μmol/L)
dNTP 2μl 5mmol/L (終濃度為0.2μmol/L)
10×PCR緩沖液 5μl 1/10體積 (終濃度為1×)
MgCl2 3μl 25mmol/L (終濃度為1.5mmol/L)
Taq DNA聚合酶 0.5μl (終濃度約1～5U/μl)
ddH2O 補到終體積為50μl，混勻後，離心15 s使反應成分沉於管底。
(2) 加入礦物油20～30μl（2～3滴），以避免反應液蒸發(有熱蓋的PCR儀可省此步驟)，然後將反應管置於95℃（變性）5min。
(3) PCR的循環程序一般為：94℃～96℃變性30s， 50℃～55℃退火30～60s，72℃延伸(1kb/1～2min)，循環25～30次。末次循環結束後，將反應管置於72℃溫育5min，以確保充分延伸。
3. pcr中mg2+作用
1.化學本質都是蛋白質,
2.合成位置一般都在核糖體內.
3.作用：
解旋酶：就是作用DNA的,一般用在PCR技術中來打開一些DNA的二級結構.例如一些發卡結構,有利用DNA的復制.
DNA聚合酶：在PCR過程中,以DNA或cDNA為模板,以引物,dNTP,Mg2+等試劑為原料復制DNA所用到的一種不可或缺的酶.
RNA聚合酶和DNA聚合酶一樣,只是他是用來復制RNA的.
逆轉錄酶：以RNA為模板,把RNA轉變為單鏈的cDNA.以利於後續的DNA克隆以及文庫構建.
限制酶：就是通常所說的限制性內切酶,不同酶的作用位點不一樣切斷DNA,一般用於分子克隆與載體構建等基因工程技術.
DNA邊接酶：就是將限制性內切酶切斷的DNA片斷又重新連接成一條DNA.連接的DNA片斷一定是同一個限制性內切酶切割產生同樣粘端的片段,或者是不同酶切割產生平端的片段,但是這樣的連接效率一般較低.
4.這些酶一般通過克隆,表達獲得.存在不同生物體內.
4. pcr中加mg是為什麼
PCR反應需要加鎂離子，並且鎂離子濃度的總量應該比dNTPs的濃度高，常用1.5mmol/L。 鎂離子是加在PCR反應的緩沖液中的，成分是最復雜的，除水外一般包括四個有效成分：
1、緩沖體系，一般使用HEPES或MOPS緩沖體系；
2、一價陽離子，一般採用鉀離子，但在特殊情況下也可使用銨根離子；
3、二價陽離子，即鎂離子，根據反應體系確定，除特殊情況外不需調整；
4、輔助成分，常見的有DMSO、甘油等，主要用來保持酶的活性和幫助DNA解除纏繞結構。 緩沖液的目的是提供合適的酸鹼度與某些離子，而PCR反應五要素是：引物(PCR引物為DNA片段，細胞內DNA復制的引物為一段RNA鏈）、酶、dNTP、模板和緩沖液（其中需要Mg2+）。
5. 在一般的pcr反應中,mg2+濃度為
以25ul的pcr體系為例，一般用濃度是25μmol/L的dNTP 2ul, 10μmol/L的引物1ul，2.5 mmol/L Mg2+ 2ul，模版一般1ul，2000u 的酶0。5ul。
buffer一般選用10x，就是稀釋10倍使用，每25ul體系加10xbuffer 2。5ul。u是酶活力單位。ng就是10－9 g ；1000x μmol/L＝ mmol/L換算是x=1000 mx=1000000ux=1000000000nx x可以是g,l,mol等國際計量單位。
6. Mg離子的作用
化學方程式：Mg(OH)2 + 2NH4Cl == MgCl2 + 2NH3.H2O離子方程式：Mg(OH)2 + 2NH4+ == Mg2+ + 2NH3.H2O
7. pcr擴增mg離子濃度
因為鎂離子是TapDNA酶不可或缺的輔助因子，鎂離子對於穩定核苷酸和穩定擴增體系，提高tapDNA聚合酶的活性十分重要。鎂離子濃度過低使酶活力降低，過高使酶催化非特異性擴增。
鎂離子是由鎂原子失去最外層的兩個電子得到的，書寫為Mg²+。
8. mg對pcr的影響
PCR實驗中的Mg2+是指鎂離子，一般在反應緩沖液中均含有鎂離子，鎂離子與聚合酶結合降低聚合反應的活化能，可以調節鎂離子濃度獲得最理想的反應條件。垍頭條萊
9. mgcl2在pcr中的作用
Mgcl2的作用主要是促進核酸骨架的形成，影響聚合酶的4活性。Mgcl2濃度過高會降低擴增特異性，濃度過低影響擴增產量。
E. 10×pcr緩沖液配製什麼意思
10×pcr緩沖液配製什麼意思：
意思就是緩沖液。10×PCR buffer 就是濃縮了10倍的PCR緩沖液，使用的時候要稀釋10倍。
F. pcr配液過程中正確的操作是什麼
本文介紹了 PCR 的詳細操作流程，強調了實驗中的注意事項，列舉了常用緩沖液的配方。幫助我們在理解實驗的基礎上更順利的操作。
聚合酶鏈式反應（Polymerase Chain Reaction，PCR）是體外合成雙鏈 DNA 的一種方法，其原理類似於天然 DNA的復制過程，其特異性主要依賴於與其目的片段兩端互補的特異引物和高特異性的酶（熱啟動酶） 。典型的 PCR反應有三個步驟：變性，退火，延伸，經過多次循環反應，獲得目的片段。
一．試劑准備
1.DNA 模板
2.特異性引物
3.dNTP Mix
4.PCR buffer
5.熱啟動酶
二．操作步驟
1.配置反應體系
將各成分依次加入到 0.5ml 的離心管中
擴增使用熱啟動酶，可在常溫下操作，非熱啟動型的酶要在低溫配置反應體系。
2.按照試劑盒說明書設置反應時間和溫度，擴增結束後電泳鑒定
3.瓊脂糖核酸電泳
· 將電泳所用器具蒸餾水洗凈，架好梳子
· 根據要分離的 DNA 片段大小制備合適濃度的瓊脂糖凝膠，准確稱取一定的瓊脂糖加入到錐形瓶中，加入 30ml 左右的電泳緩沖液（TAE 或 TBE）
· 在微波爐中加熱融化後冷卻至 40℃左右，充分混勻後倒入電泳槽中
· 室溫下凝固 40 分鍾左右，小心拔出梳子，將凝膠放置電泳槽中准備點樣
· 在電泳槽中加入電泳緩沖液，漫過凝膠表面即可，點樣孔內不要有氣泡
· 樣品點樣前准備好，（在八連管中）加入 5ul 樣品，1ul 的 6xLoding buffer 和 1ul 的染料混合，用搶將混合後的樣品緩緩注入到點樣孔中，注意不要串孔
· 按照正負極（紅正黑負），接通電源，電壓 40-60V，時間 30-40min，可根據溴酚藍的位置判斷是否終止電泳
· 電泳結束，關閉電源，凝膠成像觀察，並對比 marker 確定片段大小
不同的瓊脂糖濃度分離不同大小的 DNA 片段：
G. 問一下，我想稀釋PCR產物（10倍，100倍，1000倍)進行二次PCR，怎麼操作
比如吸取1ul加入到9ul水裡，再取稀釋10倍的1ul加入到9ul水你裡面，以此類推
再有他所說的影響一般在稀釋後不會存在，一般35個循環的話，稀釋一百倍是我的經驗值，當然一萬倍都是可以的
H. 問一下，我想稀釋PCR產物（10倍，100倍，1000倍)進行二次PCR，怎麼操作
這個簡單唉，使用梯度稀釋法
原液
（A）
原液1ul+9ul水——稀釋10倍
（B）B剩下9ul
B的1ul+9ul水——稀釋100倍（C）C剩下9ul
C的1ul+9ul水——稀釋1000倍（D）D有10ul
分別作為模版PCR即可！！