胰蛋白酶消化液怎麼配置

A. 細胞培養時 0.25%胰蛋白酶怎麼配製

可以用PBS配，也可用無血清培養及配置。
稱取咐猜0.25g胰酶，加入到100mlPBS或無血清培養集中，攪拌混勻，避免出現泡沫（損壞蛋白)，過濾除菌，即可用，注意不要反復凍融，也不要放4度或常溫一周，否則胰族租酶會失活。
我用PBS配的，兆簡兆挺好用。

B. 如何配置胰酶+EDTA消化液

看要做檢測細胞表面標記盡量要使遲旅用胰酶消化否則能破壞表面構象導致假陰性碼清凳類情況使用彈性酶膠正激原酶等短間消化或者單獨使用EDTA

C. 10%胰蛋白酶怎麼配

首先看一下瓶子上面，寫的是多森嘩少ug，或者有的是液體狀態的看看多少濃度好春並，如果是10ug，那麼就加入100ul的去離子水友跡，得10%胰酶，如果是濃度的，比如50%，你就稀釋5倍

D. 細胞培養用的胰蛋白酶自己配置和買的試劑有什麼區別一般0.25%胰蛋白酶的用量是多少

1跟2、3的區別：酚紅，主要做指示劑用的，用來調節其PH，通過顏色可以觀察出，一般動物細胞傳代用的胰酶PH值在7.0~7.4之間。
1、2跟3的區別：主要體現在EDTA上面，動物細胞表面很多和培養皿結合的蛋白都是帶有鈣或者鎂離子的蛋白，EDTA對鈣鎂離子有很好的螯合仔絕作用，這樣就可以更好的輔念旅姿助胰酶降解相應的蛋白質，在消化效率上，會有很好提高，至於不含鈣鎂離子，這個，鎮脊想想就知道了，溶液中含鈣鎂肯定會減弱其胰酶的活性的。

E. 5%的胰蛋白酶怎麼配啊

十九份緩沖液，一份胰蛋白酶

F. 25%胰酶蛋白

EDTA是乙二胺四乙酸,一種金屬螯合劑.一般和胰蛋白酶配合使用.原因做基在於,鈣,鎂等金屬離子會降低胰酶活力,故在使用胰酶消化液時要純游謹配合加入EDTA.它可以螯合這磨友些離子,消除對胰酶的抑制.

G. 請教胰酶使用注意及貼壁細胞的消化

博凌科為生物科技-為你解答：胰酶使用注意：1、在使用胰酶細胞消化液的過程中要特別注意避免消化液被細絕或橘菌污染。2、胰酶細胞消化液消化細胞時間不宜過長，否則細胞鋪板後生長狀況會較差。貼壁細胞的消化：1、吸去培養液，用無菌的PBS、Hanks液或無血清培養液洗滌細胞一次，以去除殘余的血清2、加入少量胰酶細胞消化液，略蓋過細胞即可，根據胰酶效率差異可以增加惑減少胰酶用量。室溫放置30秒至2分鍾（不同的細胞消化時間有所不同）3、顯微鏡下觀察，細胞明顯收縮，並且肉眼觀察培養器皿底部發現細胞的形態發生明顯的變化呈白茫狀；或者用槍吹打細胞發現細胞剛好可以被吹打下來。4、此時吸除胰酶細胞消化液。加入含血清的完全細胞培養液，吹打下細胞，即可直接用於後續實驗如果發現消化不足，則加入胰酶細胞消化液重新消化。如果發現細胞消化時間過長，未及吹打細胞，細胞已經有部分直接從培養器皿底部脫落，直接用胰酶細胞培養液把細胞全部吹打下來。1000-2000g離心1分鍾，沉澱細胞，盡量去除胰酶細胞消化液後，加入含血清的完全培養液重新懸浮細胞，即可用於後續實驗。常用的細胞團塌消化液為胰蛋白酶（Trypsin），EDTA等，其功能主要是使細胞間的蛋白質（如細胞外基質）水解，改變細胞間的連接，使組織或細胞片分散成單個細胞，製成細胞懸液用於進一步的實驗。影響消化速度的因素較多，主要有胰酶溶液的活性（配製條件、凍存或4℃保存時間長短、是否反復凍融、化凍後存放時間及溫度等）、消化時的溫度（氣溫、細胞培養瓶及胰酶溶液的溫度）以及所加胰酶溶液的多少等 。加入胰蛋白酶-EDTA溶液，視細胞瓶的大小加入體積為2ml或更多（依培養器皿的大小而定），以使充分浸潤；一般消化時間約為1至3分鍾，肉眼觀察瓶底由半透明（細胞單層連接成片）轉為透明、點狀（出現細小空隙）時，棄去細胞消化液，或看見培養瓶壁呈白茫 狀即可。並加入適量的完全培養液終止消化，吹打分散；如見大量細胞片狀脫落，已消化過頭，則不能頃倒消化液而直接進行下一步操作。（消化過頭，可造成大量 細胞從瓶壁上脫下，甚至造成細胞破碎。由於血清含有非特異性胰蛋白酶抑制劑，所以加入完全培養基可以終止反應。胰酶配置方法：1、培養液配製，方便好用，對細胞影響小，並且培養液的ph值正好適合胰蛋白酶的溶解2、生理鹽水配製，要先調ph值7.2到7.4（①胰酶（1：250） 2.5 克②EDTA-Na 0.3克③NaCl 8.0克④KCl 0.4克⑤Glucose 1.0克⑥Phenol Red 0.005克⑦Water 1000 mL磁力攪拌2-3小時，調pH 7.8-8.0，過濾除菌。）3、pbs（0.1%胰酶溶液的配製：稱取胰酶粉末0.1g，先用少許滅菌過的PBS調成糊狀，然後補足到100ml。置室溫攪拌4小時或冰箱內過 夜，過濾滅菌，分裝，4℃保存備用。）; 或是hanks或是D-hanks液配製（1.稱取胰蛋白酶粉末置燒杯中，先用少許D-Hanks 平衡鹽溶液（pH7.2 左右）調成糊狀，然後再補足D-Hanks 平衡鹽溶液，攪拌混勻，置室溫4 小時或冰箱過夜，並不斷攪拌振盪；2.次日，先用濾紙粗濾，再進行過濾除菌，分裝入瓶中，低溫冰箱保存備用，常用濃度為0.25% 或0.125%。胰蛋白酶溶液偏酸，使用前可調用碳酸氫鈉溶液調pH 至7.2 左右。）一般0.45微米的一次性濾器過濾除菌，至於作用效果，需要消化一次細胞感覺一下，因為不同廠家的酶不一樣，有的作用溫和，有的作用劇烈。4、是否需要四度放置過夜，取決於你的胰酶的純度。過去的胰酶純度不高，所以難以溶解，需要四度過夜. 而現在的胰酶純度都很高，就沒有必要四度過夜。從理論上來說，四度放置過夜，給細菌生長的機會，盡管過濾可以出去細菌，可是出不掉其代謝產物。胰蛋白酶不溶,有絮狀物的原因，考慮有：1、過期或是酶已經部分變性2、溶液ph值不對3、在沒過濾之前的絮狀沉澱是正常現象，因胰酶多取自動物胰腺，沉澱為並團組織塊，過濾後即可

H. 胰蛋白酶配製需要緩沖液嗎

樣品是粗蛋卜答白。 胰蛋白酶工作條件為37度，PH8.5的微鹼性嫌弊野環境，緩沖芹喊液使用25mM的碳酸氫銨即可，終濃度為0.01ug/ul

I. 求生化試劑中用於細胞培養的胰蛋白酶EDTA消化液的使用方法。

1. 貼壁細胞的消化：
a) 吸去培養液，用無菌的 PBS、Hanks 液或無血清培養液洗滌細胞一次，以去除殘余的血清。
b) 加入少量胰蛋白酶-EDTA 消化液，蓋過細胞即可，室溫放置 1-2 分鍾。不同的細胞消化時間有所不同，對於貼壁牢固的細胞可適當延長消化時間。
c) 顯微鏡下觀察，細胞明顯收縮，並且肉眼觀察培養器皿底部發現細胞的形態發生明顯的變化；或者用槍吹打細胞發現細胞剛好可以被吹打下來。此時吸除廳舉消化液。加入含血清的細胞培養液，吹打下細胞，即可直接用喚彎於後續實驗。
d) 如果發現消化不足，可加入胰蛋白酶-EDTA 消化液重新消化。
e) 如果發現細胞消化時間過長，未及吹打細胞，細胞已經有部分直接從培養器皿底部脫落，和伏悶直接用胰酶細胞培養液把細胞全部吹打下來。1000-2000g 離心 1 分鍾，沉澱細胞，盡量去除胰酶細胞消化液後，加入含血清的完全培養液重新懸浮細胞，即可用於後續實驗。
2. 組織的消化：
不同的組織需要消化的時間相差很大，通常以消化後可以充分打散組織為宜。
可以看看索萊寶的胰蛋白酶EDTA消化液。