酸性固體培養基怎麼配置

『壹』 配置培養基的原則有哪些

配置培養基的原則有：

1、選擇適宜的營養物質：

所有微生物生長繁殖均需要培養基含有碳源、氮源、無機鹽、生長因子、水及能源，但由於微生物營養類型復雜，不同微生物對營養物質的需求是不一樣的，因此首先要根據不同微生物的營養需求配製針對性強的培養基。

2、營養物質濃度及配比合適：

培養基中營養物質濃度合適時微生物才能生長良好，營養物質濃度過低時不能滿足微生物正常生長所需，濃度過高時則可能對微生物生長起抑製作用。

3、控制pH條件：

培養基的pH必須控制在一定的范圍內，以滿足不同類型微生物的生長繁殖或產生代謝產物。各類微生物生長繁殖或產生代謝產物的最適pH條件各不相同，一般來講，細菌與放線菌適於在pH7-7.5范圍內生長，酵母菌和黴菌通常在pH4.5-6范圍內生長。

4、控制氧化還原電位：

不同類型微生物生長對氧化還原電位(F)的要求不一樣，一般好氧性微生物在F值為+0.1V以上時可正常生長，一般以+0.3一+0.4V為宜，厭氧性微生物只能在F值低於+0.1V條件下生長，兼性厭氧微生物在F值為+0.1V以上時進行好氧呼吸，在+0.1V以下時進行發酵。

5、原料來源的選擇：

在配製培養基時應盡量利用廉價且易於獲得的原料作為培養基成分，特別是在發酵工業中，培養基用量很大，利用低成本的原料更體現出其經濟價值。

6、滅菌處理：

要獲得微生物純培養，必須避免雜菌污染，因此對所用器材及工作場所進行消毒與滅菌。對培養基而言，更是要進行嚴格的滅菌。

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液體培養基：80%～90%是水，其中配有可溶性的或不溶性的營養成分的培養基。

固體培養基：一類配製成的固體狀態的基質。根據性質又分為固化培養基、非可逆性固化培養基、天然固態培養基、濾膜。

半固體培養基：指在液體培養基中加入少量的凝固劑而配製成的半固體狀態的培養基。

脫水培養基：又稱預制乾燥培養基，指含有除水分外的一切成分的商品培養基。

特殊培養基：

1、選擇性培養基：選擇性培養基是指根據某種微生物的特殊營養要求或其對某化學、物理因素的抗性而設計的培養基。其功能是使混合菌樣中的劣勢菌變成優勢菌，從而提高該菌的篩選效率。

2、酵母菌富集培養基：葡萄糖5%，尿素0.1%，硫化銨0.1%，磷酸二氫鉀0.25%，磷酸氫二鈉0.05%，七水合硫酸鎂0.1%，七水合硫酸鐵0.01%，酵母膏0.05%，孟加拉紅0.003%，pH4.5。

3、Ashby無氮培養基：富集好氧自生固氮菌，甘露醇1%，磷酸二氫鉀0.02%，七水合硫酸鎂0.02%，氯化鈉0.02%，二水合硫酸鈣0.01%，碳酸鈣0.5%。

培養基在使用前通過高壓或過濾滅菌。防止污染應該注意以下事項：

1、確認工作細胞庫是否被污染，確認毒種工作種子批是否被污染，確認所用培養基及其添加成分是否被污染，均可用細菌、真菌及支原體無菌試驗來確認並排除。同時要對無菌試驗培養基的靈敏度進行驗證。實際生產中，可以從配製好的培養液中取少量加入營養瓊脂於恆溫培養箱內培養，48小時即可觀察有無污染。

2、其它：高壓滅菌設備、過濾除菌設備均應進行驗證，確保滅菌和除菌效果;前者應在投產前及其後的每6個月進行驗證，後者應在每次除菌前、後進行驗證工作(至少應在除菌後進行一次)。

3、另外，應將有毒區與無毒區嚴格分開，並有各自獨立的空氣凈化系統及孵室，有毒區對無毒區應保持相對負壓，防止病毒對培養細胞(尤其是細胞庫)的污染。

『貳』 固體培養基的制備

固體培養基的制備：

1、稱取

用精確度1/100的電子天平稱取培養基所需葯品。先根據配方計算出配置一定量培養基所需的各種成分葯品的量，然後用天平準確稱取。稱量時用稱量紙折疊成簸箕狀盛放葯品。稱量紙的折疊方法。

6、滅菌

分裝好的培養基應立即進行滅菌。

7、倒平板

滅菌溶化的培養基冷卻到50℃左右後，倒入無菌乾燥的培養皿中。培養基的溫度不能過高，否則容易在培養皿的內蓋上形成太多的冷凝水；溫度太低，培養基又容易凝固成塊，無法製成平板。

倒平板時，應在靠近酒精燈火焰進行，以免外界的雜菌落入平板內，左手拿培養皿，右手拿三角瓶的底部，用左手的小指和手掌部位把三角瓶的棉塞拔下，灼燒瓶口，用大拇指和食指把培養皿蓋打開一條縫，至瓶口剛好伸入，倒入培養基，以鋪滿底為限，不超過培養皿高度的三分之一，迅速蓋好蓋，放在桌面上，輕輕地轉動培養皿，使培養基分布均勻，冷凝後即可。

8、擺斜面

裝在試管中的瓊脂培養基，在滅菌完成後，趁熱立即擺放在木棒（或玻璃棒）上，並完成適時地斜度，冷卻後，瓊脂凝固即成斜面。斜面長度不要超過試管的二分之一。

9、質量檢查

培養基滅菌後應仔細檢查一遍，發現有破裂、水分浸入、色澤異常、棉塞被培養基沾染，都要丟棄，不能再用。並測定其最終pH。

還需要進行無菌檢查和效果檢查。無菌檢查是將滅菌後的培養基取1管（瓶）~2管（瓶），37℃恆溫培養1d~2d，確定無雜菌生長；效果檢查是用標准菌種接種在相關的培養基上檢查菌的生長、形態及生化情況，與已知情況相符。兩種情況都合格，配製的培養基方可使用。